ICAM-1分子発現調節に関与する新たなサイトカインの遺伝子クローニング

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04670382
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 宮坂 信之 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (30157622)
• キーワード: 接着分子 / 癌転移 / 血管内皮細胞

研究概要

ヒトT白血病細胞株CCRF-CEM(以下CEMと略)の培養上清中に存在するICAM-1発現増強因子(CAM-RF)の分離・精製と遺伝子クローニングを試みた。その結果、CAM-RFは血管内皮細胞上のICAM-1,VCAM-1,E-セレクチン発現を増強し、しかもIL-1,TNFα,IFNγとは異なる新たなサイトカインであることが判明した。さらに、CAM-RFはCEM細胞と血管内皮細胞の接着を用量依存的に増強したことより、CEMの強い転移能の一部がCAM-RFによって担われている可能性が推測された。
次に、CEMよりmRNAを精製し、cDNAを合成した後、CD8クローニングベクターのBst XI部位に挿入することによりcDNAライブラリーを作成した。これを用いて大腸菌MC1061/P3を形質転換し、これよりcDNA/CD8を回収、COS細胞にトランスフェクトし、その培養上清中のCAM-RF活性についてスクリーニングを行った。その結果、いくつかのpositive colonyが得られたため、現在、限界希釈法を用いることによりpositive cloneを得る努力をしているところである。これが得られればただちに遺伝子クローニングに取りかかり、塩基配列の決定を行い、既知の遺伝子との異同あるいは相同性の検討を行う予定である。

研究成果

• [文献書誌] Totsuka,T.et al.: "Invasive human T lymphoma cells produce a novel factor which upregulates expression of adhesion molecules on endothelial cells." Experimental Hematology. 21. 1544-1549 (1993)
• [文献書誌] Koike R.et al.: "Gold sodium thiomalate downregulates adhesion molecule expression on vascular endothelial cells." Molecular Pharmacology. 46. 599-604 (1994)
• [文献書誌] Hayashi,J.et al.: "Effects of cytokines and periodontopathic bacteria on the leukocyte function-associated antigen 1/intercellular adhesion molecule" Infection and Immunity. 62. 5205-5212 (1994)
• [文献書誌] Miyasaka,N.et al.: "Augmented expression of inflammatory cytokines and adhesion molecules in accelerated nodulosis during mothotrexate therapy." Annals of the Rheumatic Diseases. 53. 480-481 (1994)