進行性ミオクローヌスてんかんの病因遺伝子(EPM1)の単離

1993 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 04670709
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 精神神経科学
• 研究機関: 慶応義塾大学
• 研究代表者: 工藤 純 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80178003)
• 研究分担者: 浅川 修一 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (30231872) ; 蓑島 伸生 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (90181966) ; 清水 信義 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50162706)
• 研究期間 (年度): 1992 – 1993
• キーワード: 21番染色体 / EPM1 / エキソントラッピング / 遺伝病 / YAC / ミオクローヌスてんかん / コスミド / BAC

研究概要

CEPHの第21染色体特異的整列YACライブラリーから、EPM1領域(21q22.3 : D21S19-PFKL-CD18)のYACを単離した。7種類のSTSを用いてPCRスクリーニングを行い、12個のYACクローンをこの領域から単離することができた。ただし、連鎖不平衡からEPM1に最近接していると予想されているPFKLは調べた13クローン中1クローンのみにしか確認されず、これより遠位側のD21S400、D21S171は調べた全てのYACクローンに含まれていなかった。これらの結果は、この領域のDNAがYACにクローニングされた時に非常に不安定であるために生じたものと思われるが、いずれにせよCEPHのYACコンティグにはギャップがあることは確かである。YAC-DNAを直接プローブとして用いることにより、平成4年度に染色体ソーティングにより作成した第21染色体特異的コスミドライブラリー(約10600クローン : 6ゲノム相当)から調製した高密度レプリカフィルター(1536クローン/フィルター)をスクリーニングした。合計371個のコスミドが同定された。さらにEPM1領域のマーカーD21S25等を含むコスミドも単離し、これらを起点としてウォーキングを行った。また独自に作製したBACライブラリー(平均110kb : 3ゲノム相当)も用いてD21S1458-D21S25-PFKL-D21S154-D21S171を含む1.2Mbのコンティグを17個のBACと98個のコスミドを用いて作成した。さらにエキソントラッピングによる未知遺伝子の探索を行い、16個の未知遺伝子由来のエキソンを発見し、EPM1の候補遺伝子KNP1、KNP3、KNP4等を単離した。

研究成果

• [文献書誌] Osoegawa,K.et al.: "An integrated map with cosmid/PAC contigs of a 4Mb Down syndrome critical region" Genomics. 32. 375-387 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nagamine,K.et al.: "Isolation of cDNA for a novel human protein KNP-I that is homologous to the E,coli SCRP-27A protein from the autoimmune polyglandular disease type I(APECED)region of chromosome 21q22.3" Biochem.Biophys.Res.Commun.225. 608-616 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Asakawa,S.et al.: "Human BAC library : Construction and rapid screening" Gene. 191. 69-79 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kudoh,J.et al.: "Localization of 16 exons to a 450Kb region involved in the autoimmune polyglandular disease type I(APECED)on human chromosome 21q22.3" DNA Res.4. 45-52 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nagamine,K et al.: "Genomic organization and complete nucleotide sequence of the TMEM1 gene on human chromosome 21q22.3" Biochem.Biophys.Res.Commun.235. 185-190 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nagamine,K.et al.: "Genomic organization and complete nucleotide sequence of the human PWP2 gene on chromosome 21." Genomics. 42. 528-531 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nagamine et al.: "Positional cloning of the APECED gene" Nature Genet,. 17. 393-398 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Osoegawa, K., Susukida, R., Okano, S., Kudoh, J., Minoshima, S., Shimizu, N., de Jong, P.J., Groet, J., Ives, J., Lehrach, H., Nizetic, D.and Soeda, E.: "An integrated map with cosmid/PAC contigs of a 4-Mb Down syndrome critical region." Genomics. 32. 375-387 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nagamine, K., Kudoh, J., Minoshima, S., Kawasaki, K., Asakawa, S., Ito, F.and Shimizu, N.: "Isolation of cDNA for a novel human protein KNP-I that is homologous to the E.coli SCRP-27A protein from the autoimmune polyglandular disease type I (APECED) region of chromosome 21q22.3" Biochem.Biophys.Res.Commun.225. 608-616 (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asakawa, S., Abe, I., Kudoh, Y., Kishi, N., Wang, Y., Kubota, R., Kudoh, J., Kawasaki, K., Minoshima, S.and Shimizu, N.: "Human BAC library : Construction and rapid screening." Gene. 191. 69-79 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kudoh, J., Nagamine, K., Asakawa, S., Abe, I., Kawasaki, K., Maeda, H., Tsujimoto, S., Minoshima, S., Ito, F.and Shimizu, N.: "Localization of 16 exons to a 450-kb region involved in the autoimmune polyglandular disease type I (APECED) on human chromosome 21q22.3" DNA Res.4. 45-52 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nagamine, K., Kudoh, J., Kawasaki, K., Minoshima, S., Asakawa, S., Ito, F.and Shimizu, N.: "Genomic organization and complete nucleotide sequence of the TMEM1 gene on human chromosome 21q22.3." Biochem.Biophys.Res.Commun.235. 185-190 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nagamine, K., Kudoh, J., Minoshima, S., Kawasaki, K., Asakawa, S., Ito, F.and Shimizu, N.: "Genomic organization and complete nucleotide sequence of the human PWP2 gene on chromosome 21." Genomics. 42. 528-531 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nagamine, K., Peterson, P., Scott, H.S., Kudoh, J., Minoshima, S., Heino, M., Krohn, K.J.E., Lalioti, M.D., Mullis, P.E., Antonarakis, S.E., Kawasaki, K., Asakawa, S., Ito, F.and Shimuzu, N.: "Positional cloning of the APECED gene." Nature Genet.17. 393-398 (1997)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より