| 研究課題/領域番号 |
04670874
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
新井 一 順天堂大学, 医学部, 助教授 (70167229)
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| 研究分担者 |
門田 静明 順天堂大学, 医学部, 助手 (60204517)
宇藤 章 順天堂大学, 医学部, 助手 (10185051)
安本 幸正 順天堂大学, 医学部, 助手 (20175649)
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| キーワード | 神経細胞 / カルシウム / グルタミン酸 / 神経毒性 / 神経保護 |
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| 研究概要 |
(A)初代培養神経細胞の確立。胎生17-19日の胎仔ラット脳海馬より初代培養神経細胞を樹立し、培養後約7日の細胞を以下の実験に供する。(B)グルタミン酸負荷、低酸素無グルコース負荷によるin vitro細胞障害モデルの作製。上述の如く樹立したラット海馬初代培養神経細胞を種々の濃度のグルタミン酸存在下に15分間培養、或は低酸素無グルコース条件下に30分間培養した後、これらの細胞を正常環境下に戻し24時間培養を継続、その時点での神経細胞障害発来の程度を細胞の形態学的変化を指標に判定する。(C)細胞内Ca2^+の測定。ラット海馬初代培養神経細胞の細胞内Ca2^+をSPEX細胞Ca2^+測定装置を用いて測定する。即ち、アセトオキシメチル化したFura-2を含有する培養液内で細胞を30-60分間培養し、Fura-2を細胞内に導入する。この細胞の340nmと360nmの励起光による励起蛍光を測定し、細胞内Ca2^+濃度を算出する。予めFura-2を導入した神経細胞にグルタミン酸負荷、或は低酸素無グルコース負荷を加え、これにより惹起される細胞内Ca2^+の変化を測定する。(D)インターロイキン1(IL-1)の神経保護作用についての検討。IL-1存在下に培養した神経細胞にグルタミン酸負荷、低酸素無グルコース負荷を加え、24時間後の細胞障害の発来について観察したところ、IL-1の神経細胞保護作用は否定的であった。(E)30℃の実験条件下で、神経細胞にグルタミン酸負荷、低酸素無グルコース負荷を加えたところ、低温条件はグルタミン酸負荷、低酸素無グルコース負荷により誘発される[Ca2^+]i上昇と神経細胞死の発現を抑制しなかった。
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