| 研究概要 |
神経膠腫を対象とした基礎研究のなかで、癌遺伝子とともに細胞成長因子とその受容体、細胞内伝達機構の解明が重要な役割を果たすと考えられてきた。神経膠腫の増殖調節機構を明らかにするため、樹立細胞株を用いて行ってきた我々の研究成果から、血清も外因性細胞成長因子も含まない基礎培地で長期継代可能な、ヒト神経膠腫由来SK-MG-1細胞の系を確立した。無添加のMCDB-104培養液で、血清添加条件下とほぼ同速度で増殖し、現在継代41代160PDLである。この細胞の順化培養液中には、(1)ヒト〓帯静脈内皮細胞の増殖促進因子で、既存のものとは性格を異にするもの(G-ECGF),(2)SK-MG-1細胞自身の増殖を非致死的に抑制する因子(G-GI),(3)PDGF類似因子で、既存のものとは異なる、長いA鎖のホモダイアー(PDGFのA鎖に特異的な抗体と交叉する、分子量25〜30KDのペプチド)の3つの因子が含まれることが明らかとなった。
G-ECGF活性は、(1)ウエスタンブロット解析から、順化培養液中にacidic FGF、basic FGFは存在しない、(2)ECGF活性はヘパリンセファローズに結合しないことから、FGF familyとは異なる因子である。細胞溶解物にはこの活性がなく、分泌型の因子によるパラクリン作用と考えられる。G-ECGFの単離精製と、そのペプチド一次構造決定のため、SK-MG-1細胞の無血清順化培養液を大量に作成し、細胞成長因子の精製を行っている(分子量30〜40KD)。成長因子のペプチド残基配列を、ペプチドシークエンサーを用いてN末から決めようと試みたが、N末のブロックがあることが判明した。現在、配列決定方法を再検討しているところである。
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