Micrococcus luteus変異株MTのPacket形成を阻止する活性を有する物質を、野生株IFO 3333の培養上清から精製することを試みた。 1.MTは、トリプシンを添加しなくても、培養条件により対数期付近においてPacketsを形成することがわかったので、活性測定系は当初の方針を変更した。多数の標品の活性を測定できるように培養プレートを容器として利用した培養系に標品を加え、一定時間後にMT細胞を抜き取り、位相差顕微鏡でPackets形成の有無を観察して、活性を定性的に+-で判定することにした。 2.IFO 3333の培養上清を限外濃縮し、濃縮液をpH6.0で平衡化したQ-Sepharose FFイオン交換カラムにかけ、食塩濃度0〜1.0Mの濃度勾配の緩衝液を流した。活性蛋白質は、食塩濃度0.38M付近で溶出された。 3.活性画分を濃縮し、pH6.0で平衡化したSephacryl S-200 HRゲル濾過カラムにかけた。活性蛋白質は、排除体積付近に溶出された。 4.得られた最終標品をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけると、2〜15%ゲルで一本のバンドが見られた。SDS存在下のゲル(4〜20%)電気泳動では、分子量約20万の位置に一本と約3万以下の位置に数本のバンドが見られ、更にメルカプトエタノール存在下では、分子量約8万以下の位置に数本のバンドが見られた。 5.ほぼ純品に近く精製されたと思われるが、精製方法には改良の余地があり、今後は方法の確立をめざす。 6.活性物質を加えて培養することによりPacket形成が阻止されたMT細胞を、走査型電顕で観察すると、細胞表面に均一に多数の粒状物質が認められた。活性物質の作用機序の解明は、今後の興味ある研究課題である。
|