| 研究課題/領域番号 |
04671129
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| 研究機関 | 岩手医科大学 |
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研究代表者 |
根本 優子 岩手医科大学, 歯学部, 助手 (10164667)
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| 研究分担者 |
客本 斉子 岩手医科大学, 歯学部, 助手 (90118274)
根本 孝幸 岩手医科大学, 歯学部, 講師 (90164665)
佐々木 実 岩手医科大学, 医学部, 講師 (40187133)
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| キーワード | 遺伝子発現 / EGF / ステロイドホルモン / 顎下腺 / アンドロゲン |
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| 研究概要 |
1.平成4年の研究の結果、マウス上皮成長因子(EGF)遺伝子第1エクソン5'上流の非翻訳領域-6kbの制限酵素地図が得られた。得られた地図をもとにして、同領域について5'側からのデイリーションシリーズを作成し、3種のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)プラスミド(SV40遺伝子のプロモーターを保持するpCAT-promotor、チミジンキナーゼプロモーターを保持するpBL5、プロモーターを持たないpBL6の各々のプラスミド)に挿入してレポータープラスミドを作成した。
2.マウスアンドロレセプターの真核細胞発現ベクター(pSVK3AR)を作成した。アンドロゲンレセプターの発現はプラスミドをCOS1細胞の導入後、単クローナル抗体を用いた酵素抗体法で確認した。
3.CATレポータープラスミドとpSVK3ARを同時にCOS1細胞に導入し、CAT分析を行った。その結果、合成アンドロゲンであるR1881添加に依存したCAT活性の上昇が-0.39kbまでの範囲を含む領域で認められた。したがって、同領域にアンドロゲン応答配列が存在するものと結論された。
4.DNA配列がわかっている+1から-896bまでの範囲について既知のグルココルチコイド応答配列(GRE)、およびサイロイド応答配列(TRE)についてホモロジー検索をおこなった。その結果、GREに相当する配列は見いださなかったが、TREに相同性の高い配列を認めた。-250b付近の同配列を合成しゲルシフト分析を行った。その結果、同配列はTREと強く競合し、一方、GREやレチノイン酸応答配列とは競合せず、サイロイドレセプター特異的な配列であることが明らかになった。同配列は既知のTREのなかでMLV-LTRのTREと最も相同性が高かった(67%)。
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