内分泌腺における腫瘍化機構の分子生物学的解析

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04671484
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 吉本 勝彦 徳島大学, 医学部・額助教授 (90201863)
• 研究分担者: 佐野 壽昭 徳島大学, 医学部, 講師 (80154128) ; 岩花 弘之 徳島大学, 医学部, 寄附講座担当教員 ; 板倉 光夫 徳島大学, 医学部, 額教授 (60134227)
• キーワード: 内分泌腫瘍 / Gsα遺伝子 / 変異 / 多発性内分泌腫瘍症1型 / 第11染色体

研究概要

約200例の内分泌腫瘍におけるGsα遺伝子コドン201あるいは227の変異の有無について検討した。ゲノム遺伝子に変異が存在すれば、PCR産物が特定の制限酵素で切断可能となるように、PCRのプライマー自体に種々の変異を導入した。制限酵素処理後のDNA断片の長さを検討することにより、放射性同位元素を用いることなく変異の有無をスクリーニングできるPCR-PIRA(primer-introduced restriction analysis)法を開発した。PCR産物を制限酵素処理後ポリアクリルアミドゲルににて泳動し、エチジウムブロマイド染色により切断の有無を検出する。スクリーニングにより変異が予測される試料に対しては、直接塩基配列決定法により塩基置換を同定した。その結果、4例の成長ホルモン(GH)産生下垂体腺腫、4例の甲状腺乳頭癌、1例のアルドステロン産生副腎皮質腺腫にGsα遺伝子コドン201の塩基置換を認めた。特にGH産生下垂体腺腫における変異の頻度は9%であり、欧米の40%に比べると低く、変異の頻度に人種差が存在することが示唆された。
またDNA自動シークエンサーを用いたマイクロサテライト解析を、パラフィン包埋試料および凍結腫瘍より抽出したDNAに応用し、腫瘍におけるヘテロ接合性の消失(LOH)を検討した。多発性内分泌腫瘍症(MEN)1型2症例において、第11染色体のMEN1型原因遺伝子が位置する第11染色体長腕(11q13)近傍のマーカーを検討したところ、下垂体、副甲状腺、膵の3つの内分泌腺の腫瘍に共通したLOHを認めた。しかも同一内分泌腺に生じた複数個の腫瘍においても共通したLOHを認めた。これらの結果より、本症における内分泌腺の腫瘍化は、第11染色体長腕(11q13)に位置するMEN1遺伝子の機能消失を共通の基盤として発生することが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Yoshimoto K et al.: "ras mutation in endocrine tumors:mutation detection by polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism" Jpn J Cancer Res. 83. 1057-1062 (1992)
• [文献書誌] Yoshimoto K et al.: "Role of p53 mutations in endocrine tumorigenesis:mutation detection by polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism" Cancer Res. 52. 5061-5064 (1992)
• [文献書誌] Yoshimoto K et al.: "Rare mutations of the Gs alpha subunit gene in human endocrine tumors:mutation detection by polymerase chain reaction-primer-introduced restriction analysis." Cancer. 72. 1386-1393 (1993)
• [文献書誌] Yoshimoto K et al.: "Relatirely good prognosis of multiple endocrine neoplasia type 2B in Japanese:Review of cases in Japan and analysis of qeuetic changes in tumors." Endocrine J. 40. 649-657 (1993)
• [文献書誌] Yoshimoto K et al.: "Critical commentary to MEN I with mediastinal carcinoid" Pathology Res.and Proct.189. 1097-1099 (1993)