HDL-アポAIの遺伝子発現と生体内代謝回転様式に関する研究

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04671503
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 朔 啓二郎 福岡大学, 医学部・第2内科, 講師 (40183371)
• 研究分担者: 山本 匡介 佐賀医科大学, 医学部・内科, 助教授 (00117285)
• キーワード: 高比重リポ蛋白 / アポ蛋白AI / 代謝回転率 / プロアポAI / 家兎 / メッセンジャーRNA / 変異アポ蛋白AI

研究概要

高比重リポ蛋白(HDL)及びその主要蛋白であるアポ蛋白(アポ)AIは、動脈硬化発症の負の危険因子として注目を浴びている。HDL、アポAIは、組織に沈着したコレステロールを引き抜く、いわゆるコレステロール逆転送系を活性化させることが主要な役割であるが、今回それらの生体内での動態を観察した。[計画1]HDL代謝を変動させる種々の条件下(抗脂血薬、降圧薬、ホルモン薬投与前後)で、ウサギプロアポAI、アポAI、及びそのイソ蛋白の生体内代謝回転様式(異化率、合成率)の変化を検討した。0.15%プラバスタチンを0.5%コレステロール負荷食下(n=4)に投与すると血清総コレステロールの著減、HDL-Cの有意な減少がみられ、アポAIFCR、合成率もそれぞれ0.546±0.017/day、14.76±1.71mg/kg/dayと低下した。これに1%プロブコール食をさらに添加すると(n=4)0.730±0.126/day、11.21±2.38mg/kg/dayとFCRの増加、合成率の有意な低下がみられた。しかし、プラバスタチン、プロブコール共にアポAImRNAレベルには影響を及ぼさなかった。[計画2]大腸菌(LN109株)由来ヒトプロアポAI(rh-Met プロアポAI)を合成、精製した。プラスミド、pアポAIはアポAI cDNAのfull lengthをEcoRIとBamHIの間に挿入した。ウサギアポAIはイモビラインドライプレート(ph4-6)を用いて精製した。rh-MetプロアポAIを^<125>Iで標識し家兎体内に注入し経時的に採血し、IEFのラジオオートグラフィからプロアポAI蛋白の代謝を観察したが家兎生体内で成熟型アポAIへの1:1の転換を確認した。[計画3]動脈硬化の危険因子として最近注入されているLp(a)も^<125>Iで標識し正常及びWHHL家兎に注目しその代謝率をみたがLDL-receptor欠損症のWHHL家兎ではLp(a)のFCRが低下した。[計画4]アポAI変異体を6種発見し(独,Dr.Assmann教授との共同)それぞれを^<125>Iで又それぞれのnativeのアポAIを^<131>Iで標識し家兎生体内へ注入したが、有意な代謝経路の差はみられなかった。

研究成果

• [文献書誌] Saku,K.et al: "In vivo conversion of recombinant human proapolipo-protein AT to apolipoprotein AT." Biochimica et Biophysica Acta. 1167. 257-263 (1993)
• [文献書誌] Hirata,K.,Saku K.et al: "Apolipoprotein(a) phenotypes and serum lipoprotein(a)levels in maintenance hemodialysis pationts." Kidney International. 44. 1062-1072 (1993)
• [文献書誌] Saku,K.et al: "Combined therapy with probucol and pravastatin in hypercholesterolemia" European Journal of Clinical Pharmacology. 44. 535-539 (1993)
• [文献書誌] Bai,H.,Saku,K.et al: "Polymorphic site study at dodon 347 of apolipoprotein A-IV in a Japanese population." Biochimica et Biophysica Acta. 1174. 279-281 (1993)
• [文献書誌] Liu,R.,Saku,K.et al: "In vivo kinetics of lipoprotein(a)in homozygous Watanabe heritable hvperlipidemic rabbits." European Journal Clinical Investigation. 23. 561-565 (1993)
• [文献書誌] Saku,K.et al: "In vitro conversion of recombinant human proapolipoprotein AI to apolipoprotein AT." Biochimica et Biophysica Acta. in press.(1994)