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1993 年度 研究成果報告書概要

酵母染色体複製起点結合タンパク質及び開始複合体についての生化学的研究

研究課題

研究課題/領域番号 04680182
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 代謝生物化学
研究機関東京大学

研究代表者

正井 久雄  東京大学, 医科学研究所, 助教授 (40229349)

研究期間 (年度) 1992 – 1993
キーワード複製起点 / in vitro DNA複製系 / DNA結合タンパク質 / DNA複製開始 / 一本鎖DNA / RNA認識モチーフ / GST融合タンパク質 / プライモソーム
研究概要

出芽酵母の染色体複製起点は11塩基対のコア配列とそれに隣り合うエンハンサー配列からなる。エンハンサー配列内にはコア類似配列が複数個現れる場合が多い。私は大腸菌において、特異的な配列を持つ一本鎖DNA上に複製複合体プライモソームが形成されることを見い出してきたので、酵母においても同様な複製複合体を単離する目的でコア配列を合む一本鎖DNA(T-rich鎖)に結合するタンパク質の単離を試みた。その結果、RNA結合モチーフとして提唱されているRNA recognition motif(RRM)を有するCTBP-1およびCTBP-5(すでに報告されているSSB1と同一であった)を単離した。
CTBP-1(これと同じ遺伝子が最近RBP1として報告された)についてはその結合特異性および結合に必要なタンパク質ドメインについて詳細な解析を行った。その結果、CTBP-1はピリミジンを含むpolydeoxyribonucleotideに強く結合すること、結合にはRNP-1とRNP-2を含む1個のRRMのみで十分であること、CTBP-1に含まれる2個のRRMは単独では元のタンパク質の10分の1の親和性をもつにすぎないが、2個存在することにより強い親和性を示すことなどを明らかにした。CTBP-1は酵母の増殖に必須ではないことから染色体複製に必須な役割をはたしている可能性は否定された。染色体上に存在するpolypyrimidineあるいはCTの繰り返し配列はH-DNAあるいはtriple helix構造などの特徴的な高次構造をとることが知られており、CTBP-1はこれらの構造と相互作用する可能性を検討している。

  • 研究成果

    (14件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (14件)

  • [文献書誌] Ikeda,M., Arai,K and Masai,H.: ""A fusion protein library : an improved method for rapid screening and characterization of DNA binding or interacting proteins"" Gene. 181. 167-171 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ikeda,M., Arai,K. and Masai,H.: ""CTBP-1/RBP-1 of Saccharomyces cerevisiae protein which binds to T-rich single-stranded DNA containing the 11 base-pair core sequence of autonomously replicating sequence,is a polydeoxypyrimidine binding protein"" Eur.J.Biochem.238. 38-47 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Masai,H., Arai,K.: ""DanA- and PriA-dependent primosomes : two distinct replicaation complexes for replication of Escherichia coli chromosome"" Frontiers in Bioscience. 1. 49-59 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Masai,H., and Arai,K.: ""DanA-dependent assembly of the ABC primosome at the A site,a single-stranded DNA containing a dnaA box"" Eur.J.Biochem.230. 384-395 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Masai,H., Miyake,T.and Arai,K.: ""hsk1+,a Schizosaccharomyces Pombe gene related to Saccharomyces cerevisiae CDC7 kinase,is required for chromosomal replication"" EMBO J.14. 3094-3104 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Masai,H., Asai,T., Kubota,Y., Arai,K.,and Kogoma,T.: ""Escherichia coli PriA" protein is essential for inducible and constitutive stable DNA replications"" EMBO J.13. 5338-5345 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 正井 久雄: "バイオマニュアルシリーズ4 遺伝子導入と発現・解析法" 羊土社, 14 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 正井 久雄: "遺伝子工学実験法" 中外医学社, 8 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ikeda, M., Arai, K and Masai, H.: ""A fusion protein liberary : an improved method for rapid screening and characterization of DNA binding or interacting proteins"" Gene. 181. 167-171 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Ikeda, M., Arai, K.and Masai, H.: ""CTBP-1/RBP-1 of Saccharomyces cerevisiae protein which binds to T-rich single-stranded DNA containing the 11 base-pair core sequence of autonomously replicationg sequence, is a polydeoxypyrimidine binding protein"" Eur.J.Biochem.238. 38-47 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Masai, H., Arai, K.: ""DnaA- and PriA-dependent primosomes : two distinct replication complexes for replication of Escherichia coli chromosome"" Frontiers in Bioscience. 1. 49-59 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Masai, H., and Arai, K.: ""DnaA-dependent assembly of the ABC primosome at the A site, a single-stranded DNA containing a dnaA box"" Eur.J.Biochem. 230. 384-395 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Masai, H., Miyake, T.and Arai, K.: ""hsk1+, a Schizosaccharomyces Pombe gene related to Saccharomyces cerevisiae CDC7 kinase, is required for chromosomal replication"" EMBO J.14. 3094-3104 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Masai, H., Asai, T., Kubota, Y., Arai K., and Kogoma, T.: ""Escherichia coli PriA protein is essential for inducible and constitutive stable DNA replications"" EMBOJ.13. 5338-5345 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 1999-03-16  

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