| 研究課題/領域番号 |
04807119
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
西崎 孝道 大阪大学, 医学部, 助手 (20237689)
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| 研究分担者 |
三宅 侃 大阪大学, 医学部, 講師 (90093468)
吉本 泰弘 大阪大学, 医学部, 助手 (10182833)
田坂 慶一 大阪大学, 医学部, 助手 (50155058)
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| キーワード | カルシウム依存性ホルモン分泌 / 細胞骨格 / アクチン / ファロイジン |
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| 研究概要 |
3年目にあたる本年度は、前年度に引き続き下垂体細胞のカルシウム依存生ホルモン分泌時における細胞骨格の中でも特にアクチン分子の変化に注目して研究を進めた。具体的には、下垂体由来の細胞株であるGH_3細胞を用いて、その細胞をジギトニンで処理して細胞膜透過性状態にし、細胞内のカルシウムイオンの濃度を自由にコントロールできるようにした上で、共焦点レーザー顕微鏡下でカルシウム刺激を加えてみた。この実験系はカルシウム依存性ホルモン分泌能を保った状態の細胞を使用して実時間でのホルモン分泌時の変化を観察することを可能としている。本年度は実験条件の改善及び新しい細胞株の導入によってカルシウム刺激時のアクチン蛋白の変化をより鮮明に捉えることに成功した。具体的には繊維状のアクチンであるF-アクチンのみに特異的に結合するファロイジンにFITCをラベルしたものを使用してGH_3細胞を染色してカルシウム刺激した場合に、刺激前にはF-アクチンは主に細胞の周辺部に多く分布しているものが、カルシウム刺激によって周辺部の染色性が減弱するとともに,細胞質部分の染色性が増強してきていることが定量的に確かめられた。このような変化は従来から考えられている開口放出時のアクチン脱重合の変化と同様であり、下垂体細胞においても副腎のクロマフィン細胞などと同様なアクチンの変化がホルモン分泌時に起こっていることが初めて確認された。
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