変異P53陽性P190タイプPh白血病細胞株における細胞死の分子機構

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 04807180
• 研究機関: 国立小児病院
• 研究代表者: 水谷 修紀 国立小児病院, 小児医療研究センター・ウィルス研究室, 室長
• キーワード: IL-6 / アポプトーシス / BCL-2

研究概要

KOPM30細胞はIL-6に反応して細胞増殖を示すが、同時に細胞死をも誘導することができる。我々はこの細胞死がどのような機序によるものであるかを明らかにする目的で形態学的観察とDNAのゲル電気泳動を行い、これがアポプトーシス機序による細胞死であることを明らかにすることができた。このアポプトーシスとBCL-2遺伝子の発現の関係をみるためにBCL-2たん白の免疫染色を行い、その発現のレベルに多様性のあることを見出した。BCL-2遺伝子を強発現させることによってこのアポプトーシスが阻止できるか否かをみるためにKOPM30にレトロウィルスの形でBCL-2遺伝子を導入する系を確立した。その結果親株のKOPM30の2倍以上のたん白を発現するB1及びB5株を樹立することに成功した。これらのサプクローンはIL-6の有無に関わらず、アポプトーシスに耐性を示した。これらの結果は親株のKOPM30の中でBCL-2を強く発現しているものはIL-6に耐性でかつIL-6に反応して増殖するが、弱く発現しているものはアポプトーシスによって死ぬことを示唆していると考えた。この可能性を吟味する目的で、親株をIL-6で処理する前後におけるBCL-2たん白の発現をFACSにより解析した。その結果IL-6処理後生存するのはBCL-2強発現のポピュレーションであり、弱発現〜陰生のポプュレーションは消失していることが明らかになった。以上の結果IL-6が細胞増殖作用を発輝するのは標的細胞にBCL-2たん白の発現のある場合であり、BCL-2たん白の発現のない場合は細胞死が誘導されるという極めて貴重な状況をは握することができた。

研究成果

• [文献書誌] K.Miyamura S.Mizutani et al.: "Detection of philadelphia chromosome positive acute lymphoblastic leukemia by polymerase chain reaction:possible eradication of minimalresidual disease by marrow transplantation." Blood. 79. 1366-1370 (1992)
• [文献書誌] T.Miyashita S.Mizutani et al.: "Carrier detection in aγglobulinemia by X chromosome inactivation analysis." Acta Paediatr Jpn. 34. 267-272 (1992)
• [文献書誌] K.Miyashita S.Mizutani et al.: "Long persistent bcr-abl positive transcript detected by polymerase chain reaction after marrow transplant for chronic myelogenous leukemia without clinical relapse:a study of 64 patients." Blood in press. (1992)
• [文献書誌] K.Miyamura S.Mizutani et al.: "Molecular diversification of dominant subclones in vivo and in vitro ph-positive ALL." Leukemia in press. (1992)
• [文献書誌] H.Kawaguchi S.Mizutani et al.: "Epstein-Barr virus infected T-lymphocytes in Epstein-Barr virus associated hemophagocytic symdrome (EBV-AHS)." J.Clin.Invest.in press. (1992)
• [文献書誌] S.Mitani S.Mizutani et al.: "bcl-2 gene rearrangement analysis of Japanese follicular lymphomas by polymerase chain reaction in formalin fixed paraffin-embedded tissue speciments." Jpn.J.Cancer Res.84. 37-41 (1993)
• [文献書誌] T.Miyashita S.Mizutani et al.: "Monoclonal proliferation of blast cell in transient Myeloproliferative Disorder (TAM) in Down syndrome." in Modern Trends in Human Leukemia 11 Sprinfer-Verlag, 5 (1992)