研究課題/領域番号 |
04F04449
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研究機関 | 横浜市立大学 |
研究代表者 |
林 眞治 横浜市立大学, 大学院・国際総合科学研究科, 教授
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研究分担者 |
SALAM Abdus Md. 横浜市立大学, 大学院・国際総合科学研究科, 特別研究員
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キーワード | 内分泌かく乱化学物質 / 河川水 / メダカ / Green fluoresence protein / 検出感度 / 下水処理放流水 / コリオゲニン / エストロゲン活性 |
研究概要 |
内分泌かく乱化学物質の多くはエストロゲン活性を持つ。河川水の化学汚染・汚濁状況を簡便に検出する手法として、エストロゲンの標的タンパクである卵膜タンパクのコリオゲニンのプロモーター領域に続いて緑色蛍光を発するタンパクの遺伝子をメダカ受精卵に導入し、エストロゲン投与によって肝臓が蛍光を発する系統を作製した。さらに、この系統のメダカを用いて、河川水中のエストロゲン活性を簡便に検索する手法を開発した。生殖腺が未分化な孵化直後の幼魚を異なる濃度のエストラジオールを含む飼育水中に曝露し、蛍光発現強度を検定した。エストロゲンへの曝露開始時期と曝露期間を変えて、検出感度の上昇を試みた。最終的に、孵化後4日令の幼若メダカに対して5日間の試料水曝露により、検出感度を25ng/litterにすることができた。一方、ビテロゲニンに対する特異的抗体を用いて、Western blottingによるタンパクの発現計測を行ったところ、50ng/litterでは有意なシグナル上昇を得られなかったが、100ng/litterでは検出可能であった。ELISA法では12.5ng/litterで検出できた。したがって、今回開発した手法の感度は、ビテロゲニンの発現を指標としたこの二つの手法の中間に位置した。さらに、横浜市内において8月に採取した比較的汚濁度の高い河川水試料を用いて、今回開発した手法とLS/MSによる検定とを比較したところ、これらの試料中のエストラジオール濃度は2.4-2.6ng/litterであり、今回の手法の検出最低濃度のさらに1/10の値であった。これらの結果、横浜市内河川水試料のエストロゲン活性は比較的低いことが確認された。今回開発した検査法は、河川試料濃縮などの過程を経る必要がないことから、下水処理施設の事故や機能不良などによって、高濃度のエストロゲン活性が河川水中に存在した場合は簡便に検出する手法として有効であることが明らかになった。
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