がん抑制遺伝子の発現クローニングと機能解析

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05152135
• 研究機関: (財)癌研究会
• 研究代表者: 野田 亮 財団法人癌研究會, 癌研究所・ウイルス腫瘍部, 部長 (30146708)
• 研究分担者: 木下 専 財団法人癌研究會, 癌研究所・ウイルス腫瘍部, 研究員 ; 秋山 暢丈 財団法人癌研究會, 癌研究所・ウイルス腫瘍部, 研究員
• キーワード: Krev-1 / rsp-1 / リバータント / MSX-2 / ras

研究概要

1.Krev-1遺伝子はGARやdominant negative変異を持つras遺伝子と共同してv-Ki-rasトランスフォーム細胞(DT細胞)に強いリバータント誘導活性を示す事が分かった。また、ロイシン・リピート構造を持つ蛋白質をコードする別のトランスフォーメーション抑制遺伝子rsp-1も同様にKrev-1の活性を促進することが分かった。
2.パン酵母CDC24遺伝子をrasトランスフォーム細胞で過剰発現させたが、明らかな影響は認められなかった。
3.新しくデザインされた〓ファージ型発現ベクターを用いてヒト線維芽細胞(MRC-5)cDNAライブラリーを作成し、これをDT細胞にトランスフェクト後、培養シャーレへの接着性が増したフラット・リバータントを単離するという方法によって2クローンのリバータント誘導性cDNA(長さ3kbと1.8kb)を得た。構造分析の結果、一方(CT192)は新規の蛋白質を、またもう一方(CT124)はホメオボックス蛋白質の一種、MSX-2(Hox-8とも呼ばれる)のカルボキシ末端部分をコードしていることが判明した。ヒト胎盤ライブラリーより単離した全長のMSX-2cDNAは、鶏筋原細胞をトランスフォームする活性を示したが、CT124にはそのような活性は見出せなかった。一方、NIH3T3細胞やDT細胞においては、全長MSX-2遺伝子の生物活性は認められなかったのに対し、CT124とアンチセンスMSX-2遺伝子にリバータント誘導活性が検出された。興味深いことに、多くのヒト上皮系腫瘍由来細胞株において、MSX-2遺伝子の高発現が見出された。

研究成果

• [文献書誌] Takai,S.Nishino,N.Kitayama,H.Ikawa,Y.& Noda,M.: "Mapping of the KREV1 transforination suppressor gece and its pscudogene(KREV1P)to human chromosome 1p13.3 and 14q24.3,respcctivcly,by fluoresccncc in situ hybridization." Cytogenet.Cell Genet.63. 59-61, (1993)
• [文献書誌] Noda,M.: "Structures and Functions of the Krev-1 transformation suppressor gene and its relatives." Biochim.Biophys.Acta. 1155. 97-109 (1993)
• [文献書誌] Noda,M.: "Mechanisms of reversion." FASEB J.7. 834-840, (1994)
• [文献書誌] Kataoka,K.Noda,M.& Nishizawa,M: "Maf nuclear oncoprotein recognizes sequences related to AP-1 site and forms beterodimers with both Fos and Jun." Mol.Cell.Biol.14. 700-712 (1994)
• [文献書誌] Kumar,S.,Matsuzaki,T.,Yoshida, Y. nd Noda,M.: "Molecular cloning and biological activity of a novel developmentally regulated gene encoding a protein with B-transducin-like structure." J.Biol.Chem.(in press).