| 研究課題/領域番号 |
05262218
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| 研究機関 | 理化学研究所 |
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研究代表者 |
中村 幸夫 理化学研究所, 造血制御研究チーム, 研究員 (60231479)
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| 研究分担者 |
広近 玲 理化学研究所, 造血制御研究チーム, 研究員 (90260223)
徳元 康人 理化学研究所, 造血制御研究チーム, 研究員
中内 啓光 理化学研究所, 造血制御研究チーム, チームリーダー (40175485)
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| キーワード | HIV / CD4 / FDG(Fluorescein beta-D-galactopyranoside) / LTR |
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| 研究概要 |
HIVの感染成立に必要な分子はCD4以外に一つだけであるとすれば、マウスの3T3細胞にヒトCD4を発現させ、これにヒト高分子DNAをトランスフェクトさせた後、HIV粒子中にネオマイシン耐性遺伝子を有するレトロウイルス(日医大、島田教授との共同研究)を感染させ,G418存在下で培養して生き残る細胞があればHIVの感染が成立したことを強く示唆すると考えられる。本年度は、この実験を繰り返し行ったが、再現性をもってG418に耐性なクローンを得ることができなかった。この原因として、1)HIV感染成立にはCD4以外に2つ以上の分子が必要である、2)目的とする分子をコードする遺伝子が非常に大きい等の原因が考えられる。最近、CD26分子がHIV感染に関与している可能性が報告された。次年度はCD4とCD26を発現させた3T3細胞で上記の実験を行う予定である。
またFDG(Fluorescein b-D-galactopyranoside)がb-galactosidaseによって加水分解を受けて蛍光を発する性質を利用し、HIVLTRの下流に1acZ遺伝子を組み込んだ遺伝子を作製してマウスCOP細胞、COS細胞等にトランスフェクトした。得られた細胞にTNFを作用させ実際にb-galactosidase活性が上がり、蛍光を発するかどうかを解析した。その結果、TNFによって蛍光強度が上がるが、その程度は微弱でライブラリーのスクリーニングに耐え得るかどうかは微妙なところであった。現在HIVLTRのtat responsive elementを複数リピートさせるにことにより、もっと鋭敏にtatに反応できるような系を作ることを検討している。
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