光化学系成分mRNAの翻訳調節に関与する因子の研究

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05266209
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 杉浦 昌弘 名古屋大学, 遺伝子実験施設, 教授 (80027044)
• 研究分担者: 広瀬 哲郎 日本学術振興会, 特別研究員 ; 杉田 護 名古屋大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (70154474)
• キーワード: RNA結合蛋白 / イントロン / タバコ / 翻訳系 / 遺伝子

研究概要

1.遺伝子特異的RNA結合蛋白:大腸菌で発現させた5種のタバコ葉緑体RNA結合蛋白はUVクロス・リンク実験の結果、petDの3'非翻訳領域とtrnF、trnEYDの前駆体領域に結合することを明らかにした。また、これら3種の基質を用いた免疫沈降実験でcp28とcp31が検出された。従って、RNA結合蛋白は比較的多種のRNAに結合すると考えられる。
2.RNA結合蛋白とその遺伝子:タバコ葉緑体cp33をコードする新しいcDNA、33k-6、を分離・解析した。このcDNAは3'側に78bpの挿入配列を持つためC-末端側のアミノ酸配列はcp33と異なる。この遺伝子を単離・解析したところ、この78bpの配列は第3イントロンに由来することが明らかになり、33k-6 cDNAはオルタナテイブ又は不完全スプライシングによるものであることを示した。この遺伝子の上流域にはTATAボックスは見られず転写開始点も複数個所あるため、ハウスキーピング遺伝子と考えられる。
3.In Vitro翻訳系:タバコ葉緑体の抽出液より翻訳系の開発を進め、ポリ(U)を鋳型として高い活性を得た。引続き葉緑体mRNAを用いて系の効率化に努めている。

研究成果

• [文献書誌] Yuqing Li: "Structure and expression of the tobacco nuclear gene encoding the 33 kd chloroplast ribonucleoprotein." Molecular & General Genetics. 239. 304-309 (1993)
• [文献書誌] Yuko Murayama: "Purification of chloroplast elongation factor Tu and cDNA analysis in tobacco:the existence of two distinct chloroplast elongation factor Tu species." Plant Molecular Biology. 22. 767-774 (1993)
• [文献書誌] Antonio Vera: "The existence of premature 16S rRNA species in plastid ribosomes." FEBS Letters. 327. 29-31 (1993)
• [文献書誌] Tetsuro Hirose: "cDNA structure,expression and nucleic acid-binding properties of three RNA-binding proteins in tobacco:occurence of tissue-specific alternative splicing." Nucleic Acids Research. 21. 3981-3987 (1993)
• [文献書誌] Junichi Obokata: "Molecular Heterogeneity of Photosystem I." Plant Physiology. 102. 1259-1267 (1993)
• [文献書誌] Hiraku Itadani: "Structure and expression of a cDNA encoding an RNA helicase-like protein in tobacco." Plant Molecular Biology. 24. 249-252 (1994)
• [文献書誌] Masahiro Sugiura: "Organization and expression of the chloroplast genome from higher plants.(pp.307-312) in“The Proceedings of Endocytobiology V"(H.Ishikawa,eds.)" Tubingen University Press, 6 (1993)