| 研究課題/領域番号 |
05271204
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
小島 至 群馬大学, 内分泌研究所, 教授 (60143492)
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| 研究分担者 |
田中 滋康 群馬大学, 内分泌研究所, 助手 (90146233)
柴田 宏 群馬大学, 内分泌研究所, 講師 (20235584)
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| キーワード | インスリン / グルコーストランスポーター / GTP結合蛋白 / 脂肪細胞 |
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| 研究概要 |
本年度はラット脂肪細胞を用い、グルコーストランスポーター(GLUT4)のエンドサイトーシスを測定する実験系を確立し、これを用いてGLUT4のエンドサイトーシスにおけるGTP結合蛋白の関与を検討した。1)エンドサイトーシスを測定する系の確立:細胞膜を透過性にした脂肪細胞にインスリン処理を行い、その後KCNを投与して細胞内のATPを枯渇させると細胞膜の表面にGLUT4が集積する。その後、トリプシンを投与してGLUT4の限定分解を行うと36KDaの蛋白が得られる。その後KCNを除去するとGLUT4及び限定分解を受けた36KDaフラグメントはエンドサイトーシスを受ける。一定時間の後に細胞をホモゲナイズして低密度ミクロゾーム分画の36KDaフラグメントをウエスタンブロットで検出する。36KDaフラグメントはエンドサイトーシスによってエンドゾームに集積したものであることから、エンドサイトーシスを測定することが出来る。2)GLUT4のエンドサイトーシスとGTP結合蛋白:この系を用いてGLUT4エンドサイトーシスに対するGTPアナログの効果を検討したところ、エンドサイトーシスがGTPによって促進すること、この作用は非水解性のGTPでは逆に抑制され、GTPの加水分解が必要であることが明らかになった。
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