胸腺内分化モデルの確立による自己認識T細胞クローンの選択に関する分子免疫学研究

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05272106
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 垣生 園子 東海大学, 医学部・生体防御機構系免疫学部門, 教授 (30051618)
• 研究分担者: 熊谷 善博 順天堂大学, 医学部, 非常勤講師 (80175314) ; 伊藤 守 東海大学, 実験動物中央研究所, 室長 (00176364) ; 佐藤 健人 東海大学, 医学部・生体防御機構系免疫, 助手 (50235363) ; 西村 孝司 東海大学, 医学部・生体防御機構系免疫, 助教授 (30143001) ; 垣生 園子 東海大学, 医学部・生体防御機構系免疫, 教授 (30051618)
• キーワード: トランスジエニックマウス / T細胞抗原レセプター(TCR) / positive selection / negative selection / MHC拘束性 / 胸腺細胞

研究概要

1)TCR transgenic(Tg)マウスの系統置換とそれを用いたin vitroに於けるpositive selectionの誘導:MHC11及びMHC1拘束性に分化するT細胞クローンからなるTCR TgマウスをMHCの異なる系統と戻し交配し、MHC拘束性のある系統(positivebackground=PB)と拘束性のない系統(nautral background=NB)を樹立した。これらマウス胸腺から得たCD4^+CD8^+(DP)細胞を2DG処理によってリンパ球を除去した胎仔胸腺葉(FTL)或いは細胞株のmonolayerと共培養した。その結果、CD4^+(4SP)・或いはCD8^+(8SP)細胞の誘導は2DG-FTLとの培養系に於いて成功した。すなわち、【.encircled1.】MHC11拘束性 OVA認識TCR-TgマウスのDP胸腺細胞はPB-FTLでのみ4SP細胞へ分化し、NB-FTLでは分化しなかった。従って、誘導された4SP細胞は、TCR-MHC相互作用によって選択的に分化したT細胞と考える。来年度は4SPへの分化阻止を誘導する系により関連分子を明らかにする。【.encircled2.】MHC1拘束性 Ld認識のTCR-TgマウスのDP胸腺細胞はPB-FTLで 8SP細胞に分化した。しかし、NB-FTLとの培養に於いても、頻度は低いながら、8SP細胞が検出された。誘導された8SP細胞は、Tg-TCRとNBのMHC 1と交差反応の結果出現したのか、或いはTCRを介さないシグナルによって分化した可能性がある。この点は、8SP細胞の選択分化を考えるうえで重要な課題であるので、来年度解析を続ける。
2)in vitroに於ける negative selectionの誘導:
OVA-TCR-Tgマウス胸腺と種々の細胞株との培養系にOVA peptideを加えると、PB或いはNB由来いずれのDP細胞でも、当該peptideがPBのMHC-11によって提示される場合のみapoptosisによる死滅減少が誘導された。peptide提示細胞は胸腺ストローマ細胞に限定されず、I-Ad+であればB細胞でも繊維芽細胞でもapoptosis誘導可能であった。今後同一peptideによる成熟T細胞とのapoptosisとの比較より関連分子を検索する。

研究成果

• [文献書誌] K.Hozumi、A.Kobori,T.Sato,H.Nozaki,S.Nishikawa,T.Nishimura and S.Habu.: "Pro-T cells in fetal thymus express c-kit and RAG-2 but lack TCR-gene re-arrangement" Eur.J.Immunol.(In press). (1994)
• [文献書誌] T.Sato,T.Sasahara,Y.Nakamura,T.Osaki,T.Takakuma.Y.Arata,Y.Kumagai,M.Katsuki and S.Habu.: "Naive T cells can mediate delayed-type hypersensitivity(DTH)response in transgenic mice" Eur.J.Immunol.(In press). (1994)
• [文献書誌] M.Akiyama,M.Yokoyama,M.Katsuki,S.Habu and T.Nisimura: "Lymphocyte infiltration of the skin in transgenic mice carrying the human interleukin-2 gene" Arch Dermatol.Res.285. 379-384 (1993)
• [文献書誌] H.Tamauchi,T.Sasahara,and S.Habu.: "CD4^+CD8^+cells lacking self-Mis reactiove T cells are induced in mesentric lymph nodes of Salmonella enteritidis infected mice." Immunol.Letters.8. 123-130 (1993)
• [文献書誌] B.C.Sydora,S.Habu and M.Taniguchi: "Intestinal intraepithelial lymphocytes preferetially repopulate the intestial epithelium." Int.Immunol.5. 743-751 (1993)