| 研究課題/領域番号 |
05274102
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
小川 智也 東京大学, 農学部, 教授 (30087572)
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| 研究分担者 |
遠藤 正彦 弘前大学, 医学部, 教授 (20004616)
隅田 泰生 大阪大学, 理学部, 講師 (70179282)
畑中 保丸 富山医薬大学, 和漢薬研, 助教授 (30111181)
長谷川 明 岐阜大学, 農学部, 教授 (10026429)
稲垣 冬彦 (財)東京都臨床医学総合研究所, 生理活性物質研究部門, 部長 (70011757)
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| キーワード | aFGF / ヘパリン / セレクチン / LTA / ビオチン化プローブ / ヒアルロニダーゼ / LIF / GAG |
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| 研究概要 |
本研究班は、糖鎖及び糖鎖複合体の解析・分子設計及び再構成に関する研究を遂行し。平成7年度には以下の成果を得た。稲垣はaFGFの溶液中の立体構造およびヘパリン6糖との複合体についてNMR解析を進めた。またヘパリン結合性の新規成長因子ミッドカインのC端ドメインの塩基性残基クラスターがヘパリン結合性と生理活性に機能していることを解析した。長谷川はL-セレクチンの糖鎖リガンドであるGlyCAM-1の糖鎖構造としてsLexのGalおよびGlcNAc両残基の6-O-SO_3Na誘導体を合成し、それがリガンドとして反応性が高いことを示した。隅田はグラム陽性菌のLTA画分中にその推定構造とは異なる免疫増強活性成分が存在することを確認すると共に、複数の活性成分が高分子量の複合糖脂質であることを分析、解明した。畑中は新規ビオチン化プローブを用いてβ-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼのアクセプター基質結合部位の解析を進め、ラベル生成物をアビジン補足後、エンドペプチダーゼ消化を行い、2重ラベルペプチドを得た。更にアクセプター結合領域をアミノ酸配列解析によりTyr197よりLys230のフラグメントとして決定することに初めて成功した。遠藤は精巣性ヒアルロニダーゼの逆反応として糖転移反応活性を利用し、コンドロイチン、コンドロイチン4-硫酸、及び6-硫酸をドナーに、またこれらのGAG糖鎖由来のPA化6糖をアクセプターとして用いることによりデザイン通りのGAG糖鎖配列を構築することに成功した。小川は遺伝子工学的アプローチを用いてラットLIF分子の糖鎖結合部位Asn7カ所の変異体を構築し、それぞれトランジェントにCOS細胞で発現させることによりその糖鎖結合部位の解析に成功した。またGAGの細胞内構築機構の解析に有用な分子プローブとしてコアタンパクと糖鎖との結合領域の分子構造をデザインして合成に成功した。更にそのプローブをウシ血清由来の酵素系に利用することにより予期しない配列の生成物を得ており、その中間体の役割の解明が進行中である。
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