始原生殖細胞由来の胚幹細胞株の発生工学への応用

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05275201
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 松居 靖久 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (40241575)
• キーワード: 始原生殖細胞 / 胚幹細胞 / 遺伝子ターゲッティング法 / セリン / スレオニンキナーゼ

研究概要

遺伝子ターゲッティング法では、胚幹細胞由来遺伝子の子孫への伝達率と、変異の表現形に対する遺伝的背景の影響が問題になる。こういった点を克服する目的で、代表的な近交系マウスであるC57Bl/6、Balb/c、DBA/2、C3H/He、129Sv/Jの8.5日胚の始原生殖細胞から胚幹細胞株(EG細胞)を樹立した。始原生殖細胞を膜結合型Sl因子、LIFおよびbFGFの存在下に初代、継代培養して得たEG細胞は、いずれもコロニーの形態は129Sv系統の胚盤胞から得たES細胞とよく似ており、また未分化胚幹細胞のマーカーであるアルカリ性フォスファターゼと4C9抗原を発現していることが分かった。現在これらをC57Bl/6またはBalb/cの胚盤胞にマイクロインジェクションし、キメラ形成能及び子孫への伝達の効率を調べている。また、EG細胞が未分化状態で安定に増殖するのに必要な、新しいキナーゼ型増殖因子レセプター遺伝子の同定を試みた。EG細胞のmRNAを材料に、キナーゼの保存配列に対するプライマーを使ってRT-PCRを行い、EG細胞や生殖巣などで特異的に発現する4種類のキナーゼ遺伝子(GCK1、2、3、4)をクローニングした。このうちGCK1、2は新しいセリン/スレオニンキナーゼを、GCK3はPolo like kinaseをコードし、またGCK4はトリv-rykと相同性のあるタンパク質をコードする事がわかった。さらにGCK2はcDNAライブラリーから、ほぼ全長をコードする3.4KbのcDNAを得、その配列から非レセプター型のセリン/スレオニンキナーゼをコードすることが明らかになった。今後EG細胞にこれらの遺伝子を導入することにより、その増殖における役割を解析する予定である。また、生殖細胞の増殖、分化における機能をトランスジェニックマウスと遺伝子ターゲッティング法により解析する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Pierce,D.F.: "Inhibition of mammary duct developmeut but not alveolor outgrauth during pregrancy in MMTV-TGFβ S223/225 transgenic mice" Denes&Development. 7. 2308-2317 (1993)
• [文献書誌] Coffey,R.J.: "Acceleration of mammary neoplasia in virgin mouse mammary tumorvirus enhancer/promotor-transforming grouth factor α transgenic mice by 7,12-dimethyl benzanthracene" Cancer Research. (1994)
• [文献書誌] 松居靖久: "始原生殖細胞由来の細胞株の胚幹細胞としての性質" 日本疾患モデル学会記録. 9. 9-14 (1993)
• [文献書誌] 松居靖久: "始原生殖細胞株の樹立とその性質" Tissue Culture Researeh Communicatioms. 12. 273-278 (1993)
• [文献書誌] 松居靖久: "生殖細胞の癌,テラトーマの発生機構" 実験医学. 11. 713-716 (1993)
• [文献書誌] 松居靖久: "マウス始原生殖細胞の培養" 組織培養. 19. 176-180 (1993)
• [文献書誌] 松居靖久: "Sl因子による始原生殖細胞の増殖制御機構" Medical Immunology. 26. 81-88 (1993)
• [文献書誌] 松居靖久: "C-KitとSl因子の発生過程における発現と機能" 実験医学. 11. 1686-1691 (1993)
• [文献書誌] 松居靖久: "C-Kitによる細胞内情報伝達" 生化学. 65. 1317-1321 (1993)
• [文献書誌] 松居靖久: "マウス始原生殖細胞の体外培養" 実験医学. 12. 123-130 (1994)
• [文献書誌] 松居靖久: "生殖細胞の生成と増殖,分化" 細胞工学. (1994)