| 研究課題/領域番号 |
05403034
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
三川 潮 東京大学, 薬学部, 教授 (60012613)
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| 研究分担者 |
袴塚 高志 東京大学, 薬学部, 教務職員 (60221488)
渋谷 雅明 東京大学, 薬学部, 助手 (50170923)
藤井 勲 東京大学, 薬学部, 助手 (70181302)
野口 博司 東京大学, 薬学部, 助手 (60126141)
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| キーワード | 代謝制御 / 二次代謝 / カルコン合成酵素 / カルコン合成還元酵素 / オキシドスクアレン閉環酵素 / パーオキシダーゼプロモーター / ザルコトキシン / 植物形質転換 |
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| 研究概要 |
1)フラボノイド生合成の最初の鍵酵素であるカルコン合成酵素(CHS)のゲノム遺伝子を、クズからクローニングし、発現調節領域(5'上流領域)のシークエンスを行なったところ、既に報告されているインゲンのCHSと極めて高い相同性があることが判明した。一方、カルコン生合成においてCHSと協同的に働く還元酵素(CHR)については、サザン解析から、4つのクローンが存在することが判明した。ゲノム遺伝子クローニングを行い、3つの独立したクローン得た。それら塩基配列を決定したところ、CHRの3クローンは、2つのグループに分けられることが判明した。デオキシフラボノイド生合成において、CHSとCHRは協同的に働くことから、同一の制御を受けていると推測されるが、CHSとCHRの5'上流領域の間に相同性は見られなかった。2-ヒドロキシイソフラバノン脱水酵素については、_CDNAクローニング行うべく、酵素の完全精製を目指し進行中である。
2)エンドウから精製した2,3-オキシドスクワレン:シクロアルテノール閉環酵素、2,3-オキシドスクワレン:β-アミリン閉環酵素遺伝子の_CDNAクローニングを行なった。シクロアルテノール閉環酵素については、全長のクローンを得ることができなかったが、β-アミリン閉環酵素については、全長のクローンを得、大腸菌での活性のある酵素蛋白の発現に成功した。現在、シクロアルテノール閉環酵素_CDNAの全長のクローンを得るためにクローニングを続行中である。
3)アグロバクテリウム系のベクターを基本として、強い発現能を持つ植物由来のパーオキシダーゼプロモーターを持つベクターを構築し、昆虫の抗菌蛋白Sarcotoxinの_CDNAをタバコに導入し、形質転換再生植物を作製した。
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