エンドセリン誘発収縮に関与する新しい因子の検索とそのクローニング

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05404019
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 眞崎 知生 京都大学, 医学部, 教授 (60009991)
• 研究分担者: 二宮 治明 京都大学, 医学部, 助手 (80212124) ; 沢村 達也 京都大学, 医学部, 助手 (30243033) ; 三輪 聡一 京都大学, 医学部, 助教授 (40157706)
• キーワード: エンドセリン / エンドセリン受容体 / カルシウムチャネル / 非選択的カチオンチャネル / G蛋白質

研究概要

エンドセリン(ET)による血管平滑筋収縮の機構については、かなり以前にホスホリパーゼCの活性化によるイノシトールトリスリン酸産生増加によるカルシウムイオン放出と、電位依存性カルシウムチャネルの活性化による外液カルシウムイオン流入が重要であることを指摘した。しかしこれらの系はいずれもET濃度が高い時におこる現象であり生理的なET濃度ではおこりにくいことがわかった。さらに生理的なET濃度では非選択的カチオンチャネルが活性化されこれを通ってカルシウムイオンの流入がおこることがわかった。これがET誘発血管収縮の重要な機構と考えられる。本年度はこのチャネルのcDNAクローニングを試み、いくつかのクローンの採取した。現在そのクローンを検討中である。さらに本年度はエンドセリン受容体の構造とそれにカップルするG蛋白質の検討を行った。その結果GαsはET_Aの第二細胞内ループに、GαiはET_Bの第三細胞内ループに、またGαqは両ET受容体のC末端部に結合することがわかった。それぞれのG蛋白質は異なった構造に結合することがわかった。しかし、それぞれのG蛋白質のcDNAをCOS細胞にトランスフェクトさせ、細胞内のG蛋白質レベルを上昇させるとGαsもET_Bに、GαiもET_Aにカップルすることがわかった。これらの事実はET受容体のサブタイプのはGαs,GαiそれぞれのG蛋白質に対する親和性の差で説明出来ると思われる。

研究成果

• [文献書誌] K.Ono: "Endothelin-A receptor mediates cardiac inhibition by regulating calcium and potassium currents." Nature. 370. 301-304 (1994)
• [文献書誌] N.Yasuda: "Loss of contractile activity of endothelin-1 induced by electrical field stimulation-generated free radicals." Br.J.Pharmacol.113. 21-28 (1994)
• [文献書誌] T.Enoki: "Long-lasting activation of cation current by endothelin-1 in smooth muscle cells of rabbit aorta and mouse fibroblasts." Brit.J.Pharmacol.(in press).
• [文献書誌] Y.Takagi: "Structural basis of G Protein specificity of human endothelin receptors:a study with endothelin A/B chimeras." J.Biol.Chem.(in press).
• [文献書誌] K.Ono: "A negative chronotropic effect of endothelin-1 mediated through ETA receptors in guineapig atria." Cir.Res.(in press).
• [文献書誌] Y.Fujitani: "Suppression of endothelin-1-induced mitogenic responses of human aortic smooth muscle cells by interleukin-1β." J.Clin.Invest.(in press).
• [文献書誌] T.Masaki: "Pharmacol.Rev." Williams & Wilkins, 6 (1994)
• [文献書誌] T.Masaki: "Annual Review of Pharmacology and Toxicology." Annual Reviews Inc(in press),