犬を用いた自己免疫性疾患発生メカニズム解明へのアプローチ

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05454126
• 研究機関: 麻布大学
• 研究代表者: 山田 隆紹 麻布大学, 獣医学部, 助教授 (20126460)
• 研究分担者: 土屋 亮 麻布大学, 獣医学部, 講師 (30188586)
• キーワード: 自己免疫疾患 / 犬 / T-細胞 / 表面抗原 / モノクローナル抗体

研究概要

前年度までの研究で得られた11種のモノクローナル抗体のうち3種について、免疫沈降法とウエスタンブロッテイング法により認識する抗原の分子量を検討した結果、7F1は(72KD)、6H6は(55KD)、8C12は(33KD and 38KD)をそれぞれ認識していることが判明した。マウス免疫グロブリンのクラスとしては7F1(IgG1)、6H6(IgG3)、8C12(IgG1)であった。このことから、これらの抗体はヒトのCD5、CD4及びCD8を認識していることが予想された。
この推測を裏付けるために、機能試験としてmitogen刺激試験、IL-2生産能、細胞障害活性を測定したところ、これらの抗体はヒトの汎T細胞抗原(CD5)、ヘルパー/インデューサーT細胞抗原(CD4)及びサブレッサー/キラーT細胞抗原(CD8)を認識していることが確認できた。
これらの抗体を用いて、正常犬の末梢血及び各組織(胸腺、腸間膜リンパ節、脾臓、扁桃、肝臓、腎臓、骨髄)についてflow cytometry及び免疫組織化学的検索を行った。この結果、末梢血リンパ球において7F1抗体は63.7±2.7%、6H6抗体は42.5±3.6%、8C12抗体は14.5±1.0%のリンパ球を認識していた。この値はヒトや他の動物のCD5、CD4及びCD8の分布と同様な傾向を示していた。免疫組織化学的検討でも、いずれの抗体も各臓器でT細胞領域を認識しており、抗原陽性細胞の分布は7F1>6H6>8C12であった。
さらに、自己免疫疾患の症例犬の末梢血リンパ球について、これらの抗体が認識するリンパ球サブセットを分析したところ、まダ例数が少ないため断定できないが、分布の率にはあまり大きな差がない傾向が窺われた。今後、実験的に作出した免疫亢進状態並びに免疫寛容状態の犬のデータを加えて検討すると共に、機能についても検討したいと考えている。

研究成果

• [文献書誌] Yamada,T.,Matsuda,M.,Ashida,Y.,Tsuchiya,R.,et al.: "Isolation of sccretory lgA from feline bile and bile lgA levels in growing cats." J.Vet.Med.Sci.54. 717-721 (1992)
• [文献書誌] Tsuchiya,R.,Fujise,H.,Nishizono,K.,Ashida,Y.,et al.: "A assay of ornithine carbamoyl transferase ctivity:Modification for application to bovine serum." J.Vet.Med.Sci.56. 21-26 (1994)
• [文献書誌] Yamada,T.,Kakinoki,M.,Totsuka,K.,Ashida,Y.,et al.: "Purification of canine alpha-fetoprotein and alpha-fetoprotein values in dogs." Vet.Immunol.Imunopathol.(in press). (1995)