| 研究概要 |
リポ酸はグリシン開裂酵素系のH-proteinやpyruvateなどα-keto acid dehydrogenase complexのacyltransferaseの補欠分子族として,それらの特定のリジン残基に結合している.平成5年度に我々はウシ肝ミトコンドリアからリポ酸をapoH-proteinに結合させる反応を触媒するリポ酸転移酵素(lipoyltransferase)の分離を試み,lipoyltransferaseIとIIと命名した2種のisoformを得,そのうちのlipoyltransferaseIIを単一の蛋白質として精製した.
両酵素はapoH-proteinを基質として精製されたが,本年度はこれらがH-proteinのみらずpyruvate,α-ketoglutarate,及びbranched-chain α-keto acid dehydrogenase complexのacyltransferaseにもリポ酸を転移するか否かを検討した.それらのcDNAよりlipoyl domainをPCRで増幅し,cloningを行ない,その転写・翻訳産物を基質としてリポ酸転移反応を行なった.予備的実験によれば,両酵素はいづれのlipoyl domainにもリポ酸を転移する反応を触媒した.この結果は同一の酵素が4種のアポ蛋白質を認識してリポ酸の転移を触媒することを示唆する.
LipoyltransferaseIとIIのN-末端アミノ酸配列と,lysylendopeptidase消化で得られたpeptideのアミノ酸配列を決定した.それを基にoligonucleotideを合成し,それをprobeとしてウシ肝cDNA libraryのscreeningを現在行なっている.
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