| 研究課題/領域番号 |
05454164
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
山下 哲 群馬大学, 医学部, 教授 (50025623)
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| 研究分担者 |
保坂 公平 群馬大学, 医学部, 講師 (70108992)
内田 勉 群馬大学, 医学部, 助手 (00160276)
杉本 博之 群馬大学, 医学部, 助手 (00235897)
岡村 信一 群馬大学, 医学部, 助手 (20224058)
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| キーワード | ホスファチジルコリン代謝 / 細胞増殖 / シグナル伝達 / 酵素精製 / ホスホリパーゼD / リゾホスホリパーゼ / ホスファチジン酸 / コリンキナーゼ |
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| 研究概要 |
ホスファチジルコリンはイノシトールリン脂質とともにシグナル伝達、細胞増殖に深くかかわっている。今年度は細胞増殖におけるホスファチジルコリン代謝の役割を解明するため代謝酵素の精製、性状の解析、cDNAクローニングを行なった。
1.増殖シグナル経路において中心的な役割を果たすとされるホスホリパーゼDをブタ肺ミクロソームから可溶化し、1200倍まで精製することに成功し、完全精製への道を開いた。
2.ホスホリパーゼA_2経路の酵素リゾホスホリパーゼをラット肝臓、およびブタ胃粘膜から均一にまで精製した。前者からは24kd、60kd、後者からは22kd、23kdのアイソザイムが得られた。肝臓60kd酵素は水解活性のほかにアシル基転移活性を有していた。いずれの酵素もホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸により阻害を受けることが判明し、リゾホスホリパーゼがシグナル伝達に関係していることが示された。肝臓24kd酵素、胃22、23kd酵素については抗体が得られた。ウエスタン分析により、肝24kd酵素と胃22kd酵素は免疫学的に交叉するが、肝60kd、胃23kdは免疫学的に区別できることが判明した。肝臓24kd酵素については部分アミノ酸配列の情報も得られたのでcDNAクローニングを行ない、すでにポジティブクローンを得ている。
3.ラット脳、肝臓には少なくとも調節機構の異なる2つのコリンキナーゼアイソザイムが存在することを明らかにし、それぞれを精製した。酵母変異株にヒトグリオーマcDNAライブラリーを導入し、ヒトコリンキナーゼcDNAをクローニングすることに成功した。
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