非受容体型蛋白質チロシン残基燐酸化酵素P72^<syk>の生理機能

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05454167
• 研究機関: 福井医科大学
• 研究代表者: 山村 博平 福井医科大学, 医学部, 教授 (90030882)
• 研究分担者: 柳 茂 福井医科大学, 医学部, 助手 (60252003) ; 稲津 哲也 福井医科大学, 医学部, 助手 (00242587) ; 谷口 隆信 福井医科大学, 医学部, 助手 (60217130)
• キーワード: チロシンキナーゼ / p72syk / トロンビン / トロンボキサンA_2 / コンカナバリンA / 活性化機構

研究概要

人p72sykのクローニングは今年度中に達成する予定であるが最後のステップが成功していないのでさらに続けている。一方人に反応するp72sykの抗体はポリクローナル及びモノクローナル抗体の作製に成功した。現在予定どうり系を人に移しはじめている。従って腫瘍細胞を始め病態に迫ることが可能になった。今年度得られた知見として 1)豚脾臓より全p72sykの完全精製に成功した。2)血小板を生理的リガンドであるトロンビンで刺激したところ5秒で自己燐酸化活性が上昇し10秒で最高値になりその後速やかに減退した。このことはp72sykがトロンビンによって非常に早く活性化されることを示している。この過程にはCa2+は必要でなく、逆にCa2+はp72sykの不活性化に関係していることが明かとなった。3)多核白血球をコンカナバリンAで刺激したところ血小板と全く同じ現象がみられた。この反応はチロシンキナーゼの阻害剤の添加により抑えられ同時にCa2+の細胞内流入も抑制される。4)このp72sykの活性化は様々な血球系細胞において、様々なリガンドで認められた。即ち末梢リンパ球のコンカナバリンAによる活性化、血小板のトロンボキサンAによる活性化等である。5)さらにp72sykの活性化機構として細胞を潰した系においてATPやメタルイオン不存在下においてトロンビン等のリガンドでp72sykが活性化されることを見いだした。このことはp72sykの活性化には必ずしも燐酸化反応が関与しないことを意味しており非常に大きな意義があるものと考えている。今後p72sykの特異的な活性化機構について蛋白の構造変化を含めて研究していきたい。

研究成果

• [文献書誌] Taniguchi,T.: "Protein-tyrosine kinase p72syk is activated by thrombin and is negatively regulated through Ca^<2+> Mobilization in platelets." J.Biol.Chem.268(4). 2277-2279 (1993)
• [文献書誌] Shimomura,R.: "Phosphorylation sites of myelin basic protein by a catalytic fragment of non-receptor type protein-tyrosine kinase p72syk and comparison with those by insulin receptor kinase." Biochem.Biophys.Res.Commun.192(1). 252-260 (1993)
• [文献書誌] Yamada,T.: "Association with B-cell-antigen receptor with protein-tyrosine kinase p72syk and activation by engagement of membrane IgM." Eur.J.Biochem.213. 455-459 (1993)
• [文献書誌] Takeuchi,F.: "The lectin concanavalin a stimulates a protein-tyrosine kinase p72syk in peripheral blood lymphocytes." Biochem.Biophys.Res.Commun.194(1). 91-96 (1993)
• [文献書誌] Takeuchi,N.: "Possible role of Na+influx in phorbol ester-induced down regulation of protein kinase C in HL60 cells." FEBS Lett.328. 280-284 (1993)
• [文献書誌] Asahi,M.: "Activation of protein-tyrosine kinase p72syk with Concanavalin A in polymorphonuclear neutrophils." J.Biol.Chem.268(31). 23334-23338 (1993)
• [文献書誌] Maeda,H.: "Protein-tyrosine kinase p72syk is activated by thromboxane A2 mimetic U44069 in platelets." Biochem.Biophys.Res.Commun.197(1). 62-67 (1993)
• [文献書誌] Yamamura,H.: "Spleen tyrosine kinase with SH2 domains(syk)in The protein kinase Factsbook edited by G.Hardie and S.Hanks" Academic Press Limited. (in press).
• [文献書誌] Takata,M.: "Tyrosine kinase Lyn and Syk regulate the B cell receptor-coupled Ca2+ mobilization through the distinct pathway" EMBOJ.(in press).
• [文献書誌] Yang,C.: "Purification and characterization of a protein-tyrosine kinase p72syk from porcine spleen" Eur.J.Biochem.(in press).
• [文献書誌] Sada,K.: "Activation of p72syk by thrombin in a cell-free system." Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press).
• [文献書誌] Kurosaki,T.: "Syk activation by the src-family tyrosine kinase in the B cell receptor signaling" J.Exp.Med.(in press).
• [文献書誌] 山村博平: "分子病理学" 文光堂, 6 (1993)
• [文献書誌] 箸本英吉: "実験医学" 羊土社, 6 (1993)
• [文献書誌] 谷口隆信: "実験医学" 羊土社, 6 (1993)
• [文献書誌] 箸本英吉: "現代化学" 東京化学同人, 7 (1993)
• [文献書誌] 稲津哲也: "実験医学" 羊土社, 2 (1994)