| 研究課題/領域番号 |
05454477
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
金井 淳 順天堂大学, 医学部, 教授 (00053059)
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| 研究分担者 |
矢島 寿広 順天堂大学, 医学部, 助手 (50230199)
佐渡 一成 順天堂大学, 医学部, 助手 (70205988)
藤木 慶子 順天堂大学, 医学部, 講師
堀田 喜裕 順天堂大学, 医学部, 講師 (90173608)
中安 清夫 順天堂大学, 医学部, 助教授 (10124976)
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| キーワード | 膠様滴状角膜変性症 / 格子状角膜変性症 / プレアルブミン遺伝子 / SSCP / cDNAライブラリー / プラスマイナススクリーニング / 家兎角膜内皮細胞 / NADH-ユビキノン酸化還元酵素 |
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| 研究概要 |
膠様滴状角膜変性症2例、格子状角膜変性症2例、顆粒状角膜変性症2例、斑状角膜変性症2例について診断を確認し、採血し、白血球からDNAを精製した。プレアルブミン遺伝子について、PCR(Polymerase Chain Reaction)法で増幅したDNA断片をSSCP(Single Strand Conformation Polymorphism)法によって変異の有無を検討した。変異の疑われるDNA断片についてシークエンスしたが、今のところ異常を発見していない。
岡山大学分子医化学教室より供与された家兎角膜内皮のcDNAライブラリー(Yamaguchi et al.J.Biol.Chem.,1989)を用いた。このライブラリーから1000個のクローンをナイロン膜にとった。家兎角膜と、虹彩より調整した全RNAを^<32>Pで標識し、それぞれをプローブとしてナイロン膜とハイブリダイゼーションした。角膜に発現し、虹彩に発現していないクローンを選び出した(プラスマイナススクリーニング)。インサートの塩基配列を決定し、コンピューターで解析した。角膜と虹彩は非常によく似たパターンを示したが、角膜に発現し、虹彩に発現しないクローンは10個であった。うち2個についてはすでにインサートの塩基配列の一部を決定した。1つのクローンはウシミトコンドリアのNADH-ユビキノン酸化還元酵素のB22サブユニットのcDNAとホモロジーを認め、アミノ酸配列のホモロジーは更に高く92%であった。従って、このクローンは家兎ミトコンドリアのNADH-ユビキノン酸化還元酵素のB22サブユニットのcDNAと考えられた。もう一つのクローンは今のところ、未知のcDNAと考え、検討している。
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