| 研究課題/領域番号 |
05454575
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
佐藤 哲男 千葉大学, 薬学部, 教授 (60092061)
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| 研究分担者 |
大森 栄 千葉大学, 医学部・付属病院薬剤部, 助教授 (70169069)
細川 正清 千葉大学, 薬学部, 助手 (70181500)
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| キーワード | エステラーゼ / CYP / P450 / グルタチオンS-トランスフェラーゼ / カルボキシルエステラーゼ / 遺伝子導入 / 発現 / 培養細胞 |
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| 研究概要 |
薬物代謝酵素のcDNAクローニング
平成5年度は、薬物代謝酵素遺伝子を細胞に導入・発現させるために、エステラーゼ、グルタチオンS-トランスフェラーゼ、およびP450のcDNAクローニングを行った。ラット、マウス、サルおよびヒト肝よりRNAを抽出しmRNAを精製した後にcDNAを合成し、λgt11またはλZapの発現ベクターを用いてライブラリーを作成した。cDNAライブラリーのスクリーニングはそれぞれの酵素の特異抗体をプローブに用いて行ない、陽性クローンについての塩基配列をジデオキシ法を用いて決定し、比較検討した。マウス、ラット肝よりエステラーゼ、サル肝よりP450、ヒト肝よりグルタチオンS-トランスフェラーゼと薬物代謝酵素として4種の新規cDNAのクローニングに成功した。
薬物代謝酵素の細菌、酵母、哺乳動物細胞での発現
得られたcDNAの発現の実験のなかで、平成5年度はエステラーゼの大腸菌での発現に成功した。ラット肝エステラーゼRL1のcDNAを大腸菌の発現ベクターであるpTrc99Aに組み込み、大腸菌に遺伝子を導入したところタンパクレベルでの発現が確認された。
以上、平成5年度は薬物代謝酵素のcDNAクローニングに成功し、さらに一部ではあるが大腸菌での発現にも成功したので、平成6年度は複数の薬物代謝酵素の細菌、酵母、哺乳動物細胞での発現を試みる予定である。
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