| 研究課題/領域番号 |
05557047
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| 研究種目 |
試験研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
内分泌・代謝学
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
立元 一彦 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (60240694)
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| 研究分担者 |
小島 至 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (60143492)
伊藤 漸 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (00008294)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| キーワード | ペプチド / ホルモン / 神経ペプチド / アンタゴニスト / アゴニスト / ニューロペプチドY / パンクレアスタチン / ガラニン |
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| 研究概要 |
平成5年度は細胞培養施設を創設するために、バイオクリーンベンチ、インキュベータ-、倒立顕微鏡、オートクレーブ、遠心機等を購入し、セットアップを完了した。これで培養細胞を用いるペプチドのアッセイが可能になった。そこでまず、HEL細胞を培養して、その細胞内カルシウム濃度の変化を測定することにより、ニューロペプチドYの受容体アンタゴニスト検出法を確立した。パンクレアスタチンのアンタゴニスト開発に関しては、適当なアッセイ系が知られていないので、その基礎研究としてラットの単離膵ラ氏島から調製したB細胞の初代培養系を確立し、細胞内遊離カルシウム濃度の動態およびインスリン分泌を指標にすることを検討した。膵島B細胞内の遊離カルシウム濃度はグルコース投与によって上昇したが、この上昇はパンクレアスタチンの投与で濃度依存性に抑制された。PSTの抑制作用はグルコース刺激に対して特異的で、ソマトスタチンのようにK^+チャンネルを介してインスリン分泌を抑制する可能性はなく、また、膜電位依存性Ca^+チャンネルに直接作用する可能性も少ない。そこで、PSTが膵島B細胞によるグルコースの取り込みから代謝に至る経路のどこかに作用してインスリン分泌を抑制する可能性が考えられた。こうして、ラット膵島から調製したB細胞の初代培養系がパンクレアスタチンに対するアンタゴニストの検出に役立つことが判明した。ペプチド合成に関しては、ペプチド合成法を改良することにより、高収率でペプチド合成が出来るようになった。また、ニューロペプチドYおよびパンクレアスタチンのアンタゴニスト合成のために、これらのペプチドのC末端構造に焦点を合わせ、一連のアナログおよびアナログ混合物を合成し、スクリーニングを行なった。その結果、4-10個のアミノ酸残基からなるペプチドがニューロペプチドY受容体に対する拮抗活性を有することが明らかになったので、これらのペプチドをリ-ド化合物として、非ペプチド性の受容体拮抗剤の合成へ向けて構造上の工夫を行なうことが可能になった。
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