黒種移植の臨床応用のための移植動物の開発:ヒト細胞性補体制御因子の遺伝子導入による超急性拒絶反応回避ブタの作成

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05557065
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 白倉 良太 大阪大学, 医学部, 教授 (00116047)
• 研究分担者: 中上 辰芳 日本ハム株式会社, 中央研究所, 主任 ; 重久 保 日本ハム株式会社, 中央研究所, 副主査 ; 中田 精三 大阪大学, 医学部, 助手 (50116068) ; 島崎 靖久 大阪大学, 医学部, 助教授 (60116043) ; 松田 暉 大阪大学, 医学部, 教授 (00028614)
• キーワード: CD59(MACIF) / transfection / transgenic / C9D

研究概要

昨年ブタ大動脈より血管内皮をcell line化し、DAF及びMCPさらに両者のhybridcDNAを作成し発現vector pME18s(SR alpha promoter)に組み込み、transfectionすることによりこれらの補体抑制因子の効果をみた。今年度はこれに引き続きCD59(MACIF)を同じくブタ血管内皮に発現させ、その異種細胞上での補体制御効果を測定した。DAF及びMCPに関しては発現量の少ないcloneでも効果をみとめたが、CD59に関しては効果を認めなかった。この原因として、ブタ血管内皮にC9欠損血清(C9D)を反応させたところかなり障害され、40%C9血清ではC9欠損血清にC9を加えた血清(C9D+C9)とほとんどブタ血管内皮の障害率に差を認めない事が判明した。
一方、transgenicマウスを作成しin vivoでの補体制御因子の作用の検討を試みている。ConstructionとしてはpME18s及びpCAGGSにDAF及びMCPのcDNAを挿入し、transgenicマウスを作成した。FounderはPCR及びSouthern blotにて確認し、pME18s/DAFを1lone,pME18s/MCPを6line,そしてpCAGGS/DAFを4line,pCAGGS/MCPを6line作成できている。

研究成果

• [文献書誌] S Miyagawa: "Possibility for prevention of hyperacute rejection on by DAF and CD59 in xeno transplantation" Transplant Proc. 26. 1235-1238 (1994)
• [文献書誌] S Miyagawa: "Effocts of Transfectant Molecules,MCP,DAF and MCP/DAF Hybrid on Xenogenic Vascular Endotherium" Transplaut Proc. 26. 1253-1254 (1994)
• [文献書誌] Shuji Miyagawa: "Effeds of Transfected Complement Pcgulatory Proteins,MCP,DAF,and MCP/DAF Hybrid,on Compleawt-Mediated Swine Endotherial Cell lysis." Transplantation. 58. 834-840 (1994)
• [文献書誌] Goro Matsumiya.: "Analysis of rejection mechaiuem in the rat to mouse cardiac xenotransplantation irole and characteristics of anti-endothelial cell antibody" Transplautation. 57. 1653-1660 (1994)
• [文献書誌] Goro Matsumiya: "Role of CD4+T cell in the rat to mouse cardiac xenotrans plantation." Transpl Int. 7. 654-659 (1994)
• [文献書誌] S.Miyagawa: "Effect of transplanted MACIF(CD59)on complement mediated swie endothehal cell lysis,comparing with those of MCP(CD46)and DAF(CD55)" Transplant Proc. (in press). (1995)