ダニアレルゲンの減感作治療薬(ワクチン)への応用

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05650802
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 小埜 和久 広島大学, 工学部, 助教授 (10144883)
• キーワード: ダニアレルギー / ダニアレルゲン / エピトープ / 39kDアレルゲン / 熱ショック蛋白質 / hsp70 / トロポミオシン / 新規ダニアレルゲン

研究概要

ダニアレルギーでは、患者によりアレルギーの原因となるアレルゲン分子種が異なること、更に、個々のアレルゲン分子のエピトープは蛋白部分にあることが、私達の研究で明かとなっている。そこで、本研究では、多数のダニアレルギー患者に対してアレルゲンとして機能する新規な抗原分子をコードする遺伝子をクローニングし、アレルゲン分子種構成の実態を解明しようとした。
3種の新規ダニアレルゲン遺伝子をクローニングし、それぞれの全塩基配列を決定した。(1)39kDのアレルゲンには、塩基の欠損解析よりIgE結合に必須な領域が2ヶ所存在した。そのうちの1価のアミノ酸12残基をコードする下流領域が喘息患者の特異IgEと強く反応した。このエピトープ領域に点変異を導入すると、この領域に必須のアルギニンを除いて、患者に依って認識される近傍親水性アミノ酸残基が異なることがわかった。また、この領域を化学合成したペプチドにも、喘息患者特異IgG、IgEと強い結合活性がみられた。(2)推定アミノ酸配列のホモロジー検索の結果、70kD熱ショック蛋白質に高い相同性を示す一遺伝子を見い出した。本遺伝子の発現産物に対する患者特異IgE抗体の結合は、ダニ虫体抽出物で阻害されたが、主要抗原(Der f IとDer f II)と交差反応するものではなかった。また、発現産物に特異的に反応するIgE抗体は、ダニ虫体抽出物中のATP結合性の67kD成分と反応した。(3)遺伝子発現産物のIgE結合性が主要抗原に匹敵し、トロポミオシンに相同性を示す一遺伝子を見い出した。ダニ虫体抽出物からトロポミオシンを精製し、これをCNBr分解して得られたフラグメントのアミノ酸配列を決定して、本遺伝子がダニトロポミオシンをコードしていることを明らかにした。これらの結果から、これらのアレルゲンは、それぞれこれまで見逃されてきた重要なアレルゲンの一つであることがわかった。

研究成果

• [文献書誌] 大塚正: "広島県甘日市市における29年間にわたるホヤ喘息の調査成績" アレルギー. 42. 214-218 (1993)
• [文献書誌] T.Yamaguchi: "Differences in response of patients blood cells with bronchial asthma to diverse house dust mite allergens by histamine release assay." Jpn.J.Allergol.42. 1754-1763 (1993)
• [文献書誌] T.Aki: "Cloning and characterization of cDNA coding for a new allergen from the house dust mite,Dermatophagoides farinae" Int.Arch.Allergy Immunol. (印刷中). (1994)
• [文献書誌] T.Aki: "Structure of IgE epitopes on a new 39kDa allergen molecule from the house dust mite,Dermatophagoides farinae" Int.Arch.Allergy Immunol. (印刷中). (1994)
• [文献書誌] K.Segawa: "B cell mitogenic activity of sea squirt antigen" Int.Arch.Allergy Immunol. (印刷中). (1994)
• [文献書誌] T.Aki: "Cloning and expression of cDNA coding for a new allergen from the house dust mite,Dermatophagoides farinae,flomology with human heat shock cognate proteins in the heat shock protein 70 family" J.Biochem.115. 435-440 (1994)