| 研究概要 |
ヒト臍帯静脈内皮細胞培養系について血管内皮細胞の増殖特性を検討した結果、従来汎用されて来た種々の株化樹立細胞とは異なる増殖特性を有し、Cキナーゼ(PKC)活性化により2相性の増殖制御を受けることが明らかとなった。すなわち、この内皮細胞は成長因子による刺激後12ないし15時間のG1期の後、DNA合成(S期)を開始するが、成長因子作用初期(G1早期)にPKC賦活剤であるホルボールエステルや合成1,2-ジアシルグリセロールを共存させると、DNA合成の開始時期は変わらずに最大値が2〜3倍に増大する。これに対し、G1後期にPKC賦活剤を添加すると、DNA合成は逆にほぼ完全に抑制される。PKC賦活剤の作用は、PKCをダウウンレギュレートしたPKC欠損内皮細胞てはいずれも著しく減弱することから、これらの作用は両方向ともPKC活性化を介していると考えられる。さらに、このようなPKCによる2相性増殖制御の分子機構を検討した結果、以下の知見が明らかとなった。(1)細胞周期進行をつかさどるサイクリン依存性蛋白キナーゼであるcdc2、cdk2キナーゼの活性は、G1早期におけるPKC活性化により約2倍に増大し、逆にG1後期におけるPKC活性化により完全に抑制された。(2)cdc2、cdk2の基礎蛋白である癌抑制遺伝子産物RB蛋白のリン酸化も、G1早期/G1後期PKC活性化により増殖/完全抑制の2相性の反応を示した。(3)さらに、G1/S期移行において重要な役割を果たすことが示されている転写因子E2F1、B-mybのmRNA発現もPKCにより正負両方向性の制御を受けることが明らかとなった。これらの所見は、PKCがcdc2、cdk2サイクリン依存性キナーゼの活性化機構を正・負両方向に制御し、RB蛋白リン酸化状態の変化をとおして、S期に発現する遺伝子群をtransにコントロールする転写因子の活性を制御し、S期移行を促進あるいは停止することを意味する。この結果はPKCによる増殖制御の分子機構を世界にさきがけて明らかにし得たものである。
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