カルシウムイオンによるヒスタミン遊離の制御機構:培養好塩基球性白血病細胞を用いて

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05670081
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 前山 一隆 愛媛大学, 医学部, 教授 (00157158)
• キーワード: カルシウム / ヒスタミン / 好塩基球性白血病細胞 / 免疫抑制剤 / 細胞骨格

研究概要

肥満細胞または好塩基球性白血病細胞においてはIgE受容体刺激時にヒスタミン遊離が生じ、その結果としてじんましん、喘息やときにはアナフィラキシー・ショックを起こすため、遊離を制御することがこれらの病態の改善に重要である。ラット培養好塩基球性白血病細胞(2H3)はIgE受容体凝集後にヒスタミン遊離を生じる安定した腫瘍細胞系であり細胞内Ca濃度の動態とヒスタミン遊離の関係を解析するのに最適である。イノシトール三リン酸による細胞内Ca貯蔵部位からのCaの動員と細胞外液からのCaの流入が細胞内Ca濃度の上昇をもたらすが血球細胞系のような非興奮性細胞においては、電位依存性Caチャネルは存在せず、その流入機構は不明である。本年度は細胞内Ca濃度の調節機構とCa依存性のリン酸化、脱リン酸化機構を中心にヒスタミン遊離機構を検討した。
1.細胞内Ca濃度とヒスタミン遊離の同時測定:申請者が開発した単層灌流培養系を用いて抗原刺激後に生じる2H3細胞の細胞内Ca濃度の変化とヒスタミン遊離を同時に測定し、イミダゾール誘導体SK&F96365やエコナゾールがCa流入とヒスタミン遊離の両者を抑制することが明らかとなった。
2.免疫抑制剤(FK506)のヒスタミン遊離に及ぼす作用:FK506 100nMは抗原刺激によるCaシグナルに影響を及ぼさないがヒスタミン遊離を20%に抑えた。
3.共焦点レーザー顕微測光による細胞骨格の変化:NBD-ファラシジンをプローベとしてアクチンフィラメントを蛍光化し、抗原、フォルボルエステルで刺激後の細胞骨格の変化を検討し、両刺激とも細胞膜近傍の蛍光強度を増加させた。

研究成果

• [文献書誌] Onoue,H.: "Absence of immature mast cells in the skin of Ws/Ws rats with a small depletion at tyrosine kinase domain of the c-kit gene." American J.Pathol.142. 1001-1007 (1993)
• [文献書誌] Kasugai,T.: "Infection of Nippostrongylus brasiliensis induces normal increase of basophils in mast cell-deficient Ws/Ws rats with a small deletion at the kinase domain ofc-kit." Blood. 81. 2521-2529 (1993)
• [文献書誌] Sakurai,E.: "In vivo microdialysis measurement of histamine in rat blood effects of compound 48/80 and histamine receptor antagonists." J.Pharmacol.Toxicol.Methods. 29. 105-109 (1993)
• [文献書誌] Sakai,N.: "Effects of(S)- -fluoromethylhistidine and(R)- -methylhistamine on locomotion of W/W^V mice." Pharmacol.Biochem.Behavior. 46. 95-99 (1993)
• [文献書誌] Sekizawa,K.: "Histamine N-methyltransferase modulates histamine-and antigen-induced bronchoconstriction in guinea pigs in vivo." Am.Rev.Respir.Dis.147. 92-96 (1993)