| 研究概要 |
細胞膜に存在するGPT結合蛋白質(G蛋白質)G_s・G_iによるホルモン感受性アデニレートシクラーゼの制御に関しては詳細に明らかにされている。申請者は,これら制御系に加えて,生体内でのアデニレートシクラーゼ活性化に際して重要な役割を果たすと思われる因子,GTP結合性ペプチド(分子量約3,000)をラット肝可溶性画分に見いだした。本因子はbetaアドレナリン性応答におけるGTPの効果を増幅する作用を有しており,従来より知られている高分子量および低分子量GTP結合蛋白質とは異なる分子として位置づけられる。今年度の研究により以下の知見を得た。
1,本因子の最終精製:2回の分子ふるいクロマトグラフィーにより得られた粗精製標品を逆相(C_<18>)HPLCにより精製した。GTP結合能を有する2つのピークが得られ,より高い結合能のピークに一致して,GTPのアデニレートシクラーゼ活性促進能を増幅する活性が検出された。このピークを最終精製標品とした。もう1つのピークはアデニレートシクラーゼ活性制御において本因子と相互作用する可能性が示唆されたので同時に構造・機能について分析する。
2,アミノ酸配列の決定:上記標品を気相プロティンシークエンサーにより分析したところ配列は得られず、N末端アミノ酸のブロックの存在が示唆された。現在,数種類のデブロッキング操作を試みている。デブロッキング後の標品について再びアミノ酸配列の決定を行う。
本因子のアミノ酸の部分または全配列が明らかになった時点で,これをもとにcDNAのクローニングを開始したい。
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