alpha1アドレナリン受容体遺伝子導入培養心筋細胞における各種イオンチャンネル活動の解析

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05670114
• 研究機関: 国立小児病院
• 研究代表者: 辻本 豪三 国立小児病院, 小児医療研究センター・小児薬理研究部, 部長 (80172013)
• キーワード: alpha1-アドレナリン受容体 / 遺伝子導入 / 受容体サブタイプ

研究概要

アドレナリン受容体(AR)は神経系をはじめ、循環器、内分泌系においても、重要な役割をしていることが知られている。この受容体には機能や薬剤の感受性、組織分布などにより種々サブクラス(alpha1、alpha2、beta1、beta2およびbeta3)に分けられている。これらのうち、alpha1ARはカテコールアミン(アドレナリンとノルアドレナリン)によってPI代謝亢進、細胞内Ca2+の上昇により種々の生理反応に関わっていることが知られている。本年度、我々はヒト前立腺cDNAライブラリーより、ヒトalpha1アドレナリン受容体(AR)をコードしている遺伝子の1つをクローニングした。クローニングした。この遺伝子は、全長2.28kbで、そのうちORF(open reading frame;翻訳可能な配列)は1.4kbであり、塩基配列より推定されるアミノ酸残基数は466個であった。このヒトalpha1CAR遺伝子とウシalpha1CAR遺伝子とのORFでの相同性は、塩基配列で90%、推定アミノ酸配列においては93%の非常に高い相同性を示した。また、この遺伝子はG-蛋白共役受容体ファミリーに共通の7回の膜貫通領域を持つ構造をしており、推定アミノ酸配列におけるウシalpha1CARとの膜貫通領域の相同性は97%、比較的相同性が低い7回目の膜貫通領域以降の細胞内C末端領域(テール部位)についても83%の相同性が認められた。更に、そのcDNA塩基配列を元に、逆転写酵素-PCR法にてヒト各組織におけるalpha1CARのmRNA発現を検討し、心臓、肝臓、大脳等に局在することを確認した。心筋におけるこのalpha1CARの各種イオンチャンネルへの影響を解析する目的でG蛋白質と共役する第三細胞内ループに対するペプチド抗体を作成し、パッチクランプ法を用いて検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Horie,K.,Tsujimoto,G.,et al.: "Identification of alpha1c-adrenergic receptor mRNA in bovine retinal pigment epithelium" Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.34. 2769-2775 (1993)
• [文献書誌] Tanabe,N.,Tsujimoto,G.,et al.: "Angiontensin II receptors in the rat urinary bladder smooth muscle:type 1 subtype receptors mediate contractile responses." Journal of Urology. 150. 1056-1059 (1993)
• [文献書誌] Hirasawa,A.,Tsujimoto,G.,et al.: "Cloning,functional expression and tissue distribution of human cDNA for the alpha1c-adrenergic receptor." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 902-909 (1993)
• [文献書誌] Hirasawa,A.,Tsujimoto,G.,et al.: "Distribution and developemental chage of vasopressin V_<1A> and V_2receptor mRNA in rats." Eur.J.Pharmacol.(Mol Pharmacol section). (in press).