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トロンボキサンA_2(TX)は、アラキドン酸の代謝産物であり、強力な血小板活性化作用と血管や気管支平滑筋収縮作用を示す物質であり、これらの組織において生理的、病理的に重要な役割を持つことが知られている。一方、最近我々はTXA_2受容体のcDNAクロンを得、その一次構造を解明すると同時にマウスの種々の組織におけるTXA_2受容体mRNAの発現を検討し、その広範な分布を明らかにした。本研究は、TXA_2受容体とGTP結合蛋白質の再構成系の確立と、それを用いたTXA_2受容体情報伝達機構の解明を目的としている。
1.三量体GTP結合蛋白質の精製
ヒト血小板よりその主要な三量体GTP結合蛋白質であるG_qとG_i蛋白質を種々のカラム-クロマトグラフィーを用いて、均一となるまで精製した。これらの精製G蛋白質を特異的な抗血清をもちいてそのサブタイプを解析したところ、それぞれG_q、G_<i2>であることが明らかとなった。
2.精製TXA_2受容体とGTP結合蛋白質との再構成系の確立
ヒト血小板より脂質を抽出し精製TXA_2受容体を混合したのち、ゲル濾過法により受容体の組み込まれた脂質膜を作成した。ついでこの脂質膜とGTP結合蛋白質とを希釈法を用いて再構成した。この結果受容体とGTP結合蛋白質との機能的再構成系が確立された。
3.今後の計画
確立された再構成系を用いて、アゴニストによるGTP結合やGTPase活性に対する効果を詳細に検討することによりTXA_2受容体情報伝達機構やその調節機構の解析を実施する。
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