Elマウスにおけるてんかん原因遺伝子の分離・同定

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05670155
• 研究機関: 産業医科大学
• 研究代表者: 三田 隆 産業医科大学, 医学部, 教授 (20076988)
• 研究分担者: 大森 治 産業医科大学, 医学部, 助手 (70248558) ; 笛田 由起子 産医大医療短大, 助手 (10132482) ; 平野 英保 産業医科大学, 医学部, 講師 (50040241)
• キーワード: てんかん遺伝子 / Elマウス / 制限酵素 / RFLP / cDNA / 突然変異 / Northern blotting / S-Adenosylhomocyteine hydrolase

研究概要

平成5年度、昨年に引き続き、われわれは遺伝的てんかんElマウスのcDNAライブラリーからS-Adenosylhomocysteine hydrolase(S-AdoHocysHlase)geneを分離したが、これはElマウスの生後1日目の肝で異常発現するmRNAに由来するものである。このcDNAをプローブにして、ddY,ElマウスのゲノムDNAに対し各種制限酵素(BglII,EcoRI,HindIII,MspI,PstI RsaI)によるRFLPの検出を試みた。その結果PstIがRELPを与えることが分かった。ddYの2.5kb断片がElマウスでは1.9kbとして検出され、Pst I siteの附加的突然変異が想定された。一方、同じプローブによるmRNAに対するノーザンブロッティングで、生後1日目の肝でElマウスに異常に高い発現が確認された。脳ではしかし、発現が約1/10と低く検出が困難であった。この2つの事実から、S-AdoHocysHlase geneの突然変異はてんかんElマウスに特異的であることが証明された。またF1(ddYxEl),BALB/c,C3H/He,C57BL/6J,DBA/1Jに対するPst I-RFLPの検出で、C57BL/6JとDBA/1JがElマウスタイプのパターンを示すことが分かった。C57BLとDBAの2種からはてんかん原性と関連していることが示唆される。
2年に亘る研究からわれわれは、Elマウスからてんかん関連の遺伝子を2つ分離した。一つはS-AdoHocysHlase gene,他はIsocitratedehydrogenase geneである。もともとわれわれはてんかんには複数遺伝子の関与を指摘してきており、この他Naイオンチャネル遺伝子、抑制性GABAシステム関連遺伝子がてんかん関連遺伝子として研究している。

研究成果

• [文献書誌] Sashihara,S.et al.: "Differential up-regulation of voltage-dependent Na+ channels induced by phenytoin in brains of genetically seizure-susceptible(El)and control(ddy)mice" Neuroscience. 62. 803-811 (1994)
• [文献書誌] Kawano,H.et al.: "Phenytoin,an antiepileptic drug,competitively blocked non-NMDA receptors produced by Xenopus oocytes." Neuroscience Letters. 166. 183-186 (1994)
• [文献書誌] Sashihara,S.et al: "The effect of Phenytoin on voltage-dependent Na^+ channels in epileptic El mice" Jpn.J.Psychi.Neurol.47. 369-370 (1993)
• [文献書誌] 指原俊介、三田隆: "イオンチャンネルと抗てんかん薬" 神経精神薬理. 15. 237-248 (1993)
• [文献書誌] Fueta,Y.and Mita.T.: "Susceptibility to pentylenetetrazole-induced convulsion of developing and adult El mice" Neuroscience. 18. 163-169 (1993)
• [文献書誌] Sashihara,S.et al.: "Overproduction of voltage-dependent Na^+ channels in the developing brain of genetically seizure-susceptible El mice" Neuroscience. 48. 285-291 (1992)