自己免疫疾患の自己抗原ANCAのミエロパーオキシデ-スの分子状態解析

1995 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 05670212
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 実験病理学
• 研究機関: 国立予防衛生研究所
• 研究代表者: 鈴木 和男 国立予防衛生研究所, 生物活性物質部, 室長 (20192130)
• 研究分担者: 大川原 明子 国立予防衛生研究所, 生物活性物質部, 研究員 (30260277) ; 佐々木 次雄 国立予防衛生研究所, 安全性研究部, 室長 (60142139) ; 山河 芳夫 国立予防衛生研究所, 細胞化学部, 主任研究官 (50100102)
• 研究期間 (年度): 1993 – 1995
• キーワード: 自己免疫疾患 / ミエロバ-オキシダーゼ / MPO / 好中球 / ANCA / 腎疾患 / 腎炎 / リウマチ

研究概要

慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス(SLE)、半月体形成腎炎(CRGN)などの自己免疫疾患において、最近、正常時はほとんど血中に認められない好中球の顆粒酵素のMPOが自己抗原となり抗MPO自己抗体(ANCA)が血中に増加することが問題となっている。これらの疾患において、血中MPO活性と抗MPO抗体との相関関係についてわれわれはすでに報告してしてきている。特に、病初期の血中MPO活性は高値を示し、急性炎症像に類似している。自己免疫疾患の発症機序を明らかにするために、自己抗原となるMPOの蛋白質、活性とその抗MPO自己抗体の3者の測定系を確率する必要があった。昨年度までに、ウエスタンブロットにより半月体形成腎炎の患者血清は、MPOの59 kDaの長鎖と反応し、Endoglycosidase-Hで糖を切断したところ抗MPO血清は強く反応したことから、抗MPO血清はMPOの59 kDaの長鎖の糖結合箇所付近が反応部位と推定した。そこで、本年度は、59kDaの長鎖をいくつかの部分のフラグメントに対応するリコンビナントMPOフラグメントを作成した。当初は、GSTとの融合蛋白質として作成したが、目的のサイズより小さく切断されたフラグメントのみが出来たので、Hisx6と結合したフラグメントとして作成することを試み、目的とするすサイズのリコンビナントMPOフラグメントを検出する。キレートカラムによりリコンビナントMPOフラグメントを精製し、抗ヒトMPO抗体および患者血清を用いウエスタンブロットにより反応することを確認した。

研究成果

• [文献書誌] Mohamed, A. et al.: "Production and characterrization of polyclonal anti-canine interleukin-8 antibodies." Immunology. (in press). (1996)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Saeki, T. et al.: "Significance of myeloperoxidase in rapidly progressive glomerulonephritis." Am. J. Kidney Dis. 26, 13-21, 1995.26. 13-21 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nagao, S. et al.: "Modification of delayed-type hypersensitivity reactions by muramyldipeptide in guine a pigs." FEMS Immunol. Med. Microbiol.11. 231-246 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Matsumoto, Y. et al.: "Morphological alteration of canine neutrophils induced with recombinant canine inter leukin-8." J. Toxicologic Pathol.8. 239-244 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Wang, C. -R. et al.: "T cell receptor-mediated signaling events in CD4+CD8+ thymocytes undergoing thynmic selection: Requirement of calcineurin activation for thymic positive selction but not negative selection." J. Exp. Med.181. 927-941 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 中山俊憲,鈴木和男: "免疫・Immunology Frontier : 胸腺内T細胞とシグナル伝達" メディカルビュー社, 8 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Suzuki, K., Hosaska, S., Morikawa, K., Suzuki, M., Suzuki, S., Miyoshi, M., Fujita, M., and Mizuno, S.: "Bioimaging of myeloperoxidase release into phagolysosome of viable polymorphonuclear leukocytes and reaction of the enzyme with microspheres using a highly sensitive analyzer system." IMRAS.Bioimages. 1. 13-20 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hosokawa, Y., Kawaguchi, R., Hikiji, Yamada, M., Suzuki, K., Nakagawa, T., Yoshihara T., and Yamaguchi, K.: "Cloning and characterization of four types of cDNA encoding myeloperoxidase from human monocytic cell line SKM-1." Leukemia. 7. 441-445 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Suzuki, K., Yamakawa, Y., Matsuo, Y,, Kamiya, T., Minowada, J., and Mizuno, S.: "Isolation and amino acid sequence of a chemotactic protein, LECT/Interleukin 8, from a human myeloid leukemia cell line, ML-1." Immunol.Lett.36. 71-82 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tada, M., Sawamura, Y., Sakuma, S., Suzuki, K., Ohta, H., Aida, T., and Abe H.: "Cellular and cytokine responses in the human central nervous system to intra-cranialadministration of tumor necrosis factor-alpha for the treatment of malignant gliomas.Cancer Immunol." Immunother.36. 251-259 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tada, M., Suzuki, K., Yamakawa, Y., Sawamura, Y., Sakuma, S., and Abe H.: "Human glioblastoma cells produce 77 amino acid interleukin-8 (IL-8 77)." J.Neuro-Oncol.16. 25-34 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ishikawa, J., Suzuki, S., Kunimoto, H., Hirota, Y., Mizuno, S.and Suzuki, K.: "Cloning of a canine gene homologous to the human interleukin-8-encoding gene." Gene. 131. 305-306 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shibata, M., Ohaka, T., Mizuno, S., and Suzuki, K.: "Characterization of a 64-kDa protein phosphorylated during chemotactic activation with IL-8 and fMet-Leu-Phe of human polymorphonuclear leukocytes.I.Phosphorylation of a 64-kDa and other proteins." J.Leukocyte Biol.54. 1-9 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shibata, M., Yamakawa, Y., Ohoka, T., Mizuno, S., and Suzuki, K.: "Characterization of a 64-kDa protein phosphorylated during chemotactic activation with IL-8 and fMet-Leu-Phe of human polymorphonuclear leukocytes.II.Purification and amino acid anolysis of phosphorylated 64-kDa protein." J.Leukocyte Biol.54. 10-16 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Arimura, Y., Minoshima, S., Kamiya, Y., Tanaka, U., Nakabayashi, K., Kitamoto, K., Nagasawa, T., Sasaki, T., and Suzuki, K.: "Serum myeloperoxidase and serum cytokines in anti-myeloperoxidase antibody-associated glomerulonephritis." Clin.Nephrol.40. 256-264 (1993)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Matsumoto, Y., Mohamed, A., Onodera, T., Kato, H., Ohashi, T., Goitsuka, R., Tsujimoto, H., Hasegawa, A., Furusawa, S., Yoshihara, K., Ishikawa, J., Hotta, K., Suzuki, K., and Hirota, H.: "Molecular cloning and expression of canine interleukin 8 cDNA." Cytokine. 6. 455-461 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Suzuki, K., Yamano, M., Kawai, M., Nakajima, T., Ishida-Okawara, A., Yamagoe, S., Hatsu, M., Imai, S., Suzuki, M., Mizuno, S.and Hotta, K.: "Bioimaging analysis of a novel diketopiperadine (N-TAF1/SF2771) -induced nuclear change in neutrophil-adhered A549 lung carcinoma cells." Bioimages. 2. 149-154 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Mohamed, A., Matsumoto, Y., Furusawa, S., Yoshihara, K., Matsumoto, Y., Suzuki, K., Onodera, T., and Hirota, Y.: "Production and characterrization of polyclonal anti-canine interleukin-8 antibodies." Immunology. (in press.).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Saeki, T., Kuroda, T., Morita, T., Suzuki, K., Arakawa, M., and Kawasaki, K.: "Significance of myeloperoxidase in rapidly progressive glomerulonephritis." Am.J.Kidney Dis.26. 13-21 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nagao, S., Kawabata, Y., Kitano, M., Suzuki, K., Nishikawa, T., and Takada, H.: "Modificaiton of delayd-type hypersensitivity reactions by muramyldipertide in guinea pigs.FEMS Immunol." Med.Microbiol.11. 231-246 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Matsumoto, Y., Matsumoto, Y., Onodera, T., Yamagoe, S., Suzuki, K., and Hirota, H.: "Morphological alteration of canine neutrophils induced with recombinant canine interleukin-8." J.Toxicologic Pathol.8. 239-244 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Wang, C.-R., Hashimoto, K., Kubo, S., Yokochi, T., Kubo, M., Suzuki, M., Suzuki, K., Tada, T., and Nakayama, T.: "T cell receptor-mediated signaling events in CD4+CD8+ thymocytes undergoing thynmic selection : Requirement of calcineurin activation for thymic positive selction but not negative selection." J.Exp.Med.181. 927-941 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Arimura, Y., Minoshima, S., Nagasawa, T., and Suzuki, K.: "Serum IL-8, Soluble ICAM-1, glomerular expression of cellular adhesion molecules and myeloperoxidase (MPO) release from the neutrophils in MPO-ANCA associated crescentic glomerulonephritis (CRGN)." The 5 the International Workshop on ANCA,31 August-3 September, 1993, Cambridge, UK.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Saeki, T., Kawasaki, K., Kuroda, T., Morita, T., Nakano, M., Ohtani, I., Suzuki, K., and Arakawa, M.: "Significance of myeloperoxidase (MPO) in rapidly progressive glomerulonephpritis (RPGN)." 26th American Soc.of Nephrol.Nov.14-17,1993, Boston.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nishimura.M., Arai, T., Yamagoe, S., and Suzuki, K.: "Production of monoclonal antibodies distinguishing two IL-8 family proteins, LUCT/IL-8 and MDNCF/IL-8, and recognizing both proteins." The 1993 ISICR meeting, Oct.24-28,1993, Tokyo.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ishikawa, J., Suzuki, S., Hotta, K., Hirota, Y., Mizuno, S., and Suzuki, K.: "Cloning of the gene encoding canine interleukin-8." The 1993 ISICR meeting, Oct.24-28,1993, Tokyo.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Matsumoto, Y., Mohamed, A., Onodera, T., Kato, H., Ohashi, T., Goituska, R., Tsujimoto, H., Hasegawa, A., Ishikawa, J., Hotta, K., Suzuki, K., and Hirota, Y.: "Molecular cloning and expression of canine interleukin-8 cDNA." The 1993 ISICR meeting, Oct.24-28,1993, Tokyo.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yamagoe.S., Yamakawa, Y., Matsuo, Y., Minowada, J., Mizuno, S., and Suzuki, K.: "Idenitfication of a novel cheotactic protein for polymorphonuclear leukocytes produced by a human T cell leukemia cell line." The 1993 ISICR meeting, Oct.24-28,1993, Tokyo.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Suzuki, K.: "Myeloperoxidase as virucidal activity and antigen in autoimmune disease." International Congress on Reg. of Leukocyte Production and Immune Function.Dec.1-5,1993, Sydney.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Suzuki, K., Shiino, T., Hosokawa, Y., Yamagoe, S., Kuwahara, Y., Miyoshi-Koshio, T., Honda, M., Mizuno, S., Totani, M., Yamamoto, K.: "Satellite symposium on environmental factors and HIV :" Joint Scientific Meeting of theTenth International Conference on AIDS.Yokohama, a August 8,1994.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Fujii, A., Kenri, T., Yamagoe, S., Arimura, Y., Nagasawa, T., Mizuno, S., and Suzuki, K.: "Preparation of recombinant GST-MPO fragemts of E.coli for epitope analysis of anti-MPO in MPO-III ANCA." The 6th International ANCA Workshop Paris June 28-July 1,1995.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Arimura, et al.: "Pulmonary fibrosis in myeloperoxidase (MPO) specific antineutrophil cytoplasmic antibody (MPO-ANCA) related vasculitis." The 6th International ANCA Workshop Paris June 28-July 1,1995.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Minoshima, et al.: "Release of myeloperoxidase (MPO) neutrophils in MPO-specific anti-neutrophil cytoplasmic antibody (MPO-ANCA) related glomerulonephritis." The 6th International ANCA Workshop Paris June 28-July 1,1995.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Matsumoto, Y., Hirota, Y., Yamagoe, S., Suzuki, K., Matsumoto, Y., and Onodera, T.: "Molecular cloning of canine interleukin 8 cDNA and cxpression of the recombinant protein."
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hirota, Y., Yang, M.-P., Ohta, Y., Araki, S., Matsumoto, Y., Kang, C.-B.Mohamed, A., Yoshihara, K., Furusawa, S., Suzuki, K., Onodera, T., Akiyama, K., and Sugii, S.: usefull ness of egg whte derivatives (EWD) and recombinatn bovine interferon alpha (rBoIFNalphal) in veterinary medicine.in : Vaccines in agriculture immunological application to animal health and production (eds.Wood, P., Willadsen, P., Vercoe, J., Hoskinson, R., and Demeyer, D.). CSIRO press, Melbourne, Australia, 57-63 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より