|
Ca^<2+>-ATPase遺伝子断片を用いて、ネズミマラリア原虫(Plasmodium yoelii)のDNAライブラリーをスクリーニングし、新しい陽イオン輸送性ATPase遺伝子のクローニングを行った。得られた4つのクローンから、約7.2kbの塩基配列を決定した。cDNAの部分的配列から、遺伝子の3'側にイントロンを確定した。この遺伝子産物は全長1877アミノ酸と推定され、P-typeATPase間で高度に保存されている5箇所の領域でホモロジーが高く、新しいP-typeATPaseと推定された。P-typeATPaseの燐酸化部位のアミノ酸配列の比較では、492aaの配列が明らかになっている熱帯熱マラリア原虫のPfATP3蛋白質と相同性が著しく高く(30aa/35aa)、PfATP3は我々のP-typeATPaseのホモローグと考えられた。しかし、燐酸化部位からC末側では約400aaに渡って、両者は異なっていた。この非相同領域は親水性が非常に高く、また繰り返し配列が共通に見られた。同様のことはCa^<2+>-ATPaseについて、我々がすでに明らかにしている。このマラリア原虫特有の冗長な領域について、その機能と構造を調べるために、この部分を大腸菌で発現させて、ポリクローナル抗体を作成した。これを使って、間接蛍光抗体法で、原虫における局在を調べたところ、細胞質が染まり、細胞内オルガネラに存在するATPaseの可能性が示唆された。
(注)本補助金は熱帯熱マラリア原虫遺伝子のクローニングに対してのものであるが、その研究途上で、他グループによって、熱帯熱マラリア原虫の複数のATPase遺伝子が、一部ではあるがクローニングされたので、研究の重複を避けるため、ネズミマラリア原虫の陽イオン輸送性ATPase遺伝子のクローニングを行ったものである。
|
