細菌の多糖合成に関与する糖転移酵素遺伝子の構造と機能解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05670253
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 太田 美智男 名古屋大学, 医学部, 教授 (20111841)
• 研究分担者: 荒川 宜親 名古屋大学, 医学部, 助教授 (10212622)
• キーワード: 糖転移酵素 / CPS / rfa / (遺伝子)発現 / 大腸菌 / Klebsiella

研究概要

平成7年度に得られた研究結果について概要を述べる。
(1)すでに前年度に決定したKlebsiella K2-cps遺伝子領域の全塩基配列の核ORFをデータベースより比較して相同性の高い遺伝子を検索したところ、SalmonellaのcpsG,cpsB,rfbP,orf2.8および大腸菌のgnd、HaemophilusのbexDに類似したORFが見いだされた。また、σ^<54>依存性のプロモーターがこの遺伝子領域の大部分の遺伝子の転写に関与していることが見いだされた。
(2)大腸菌K12のrfa領域に存在する、LPSのRコア合成に関わる4種の糖転移酵素RfaG,RfaB,RfaI,RfaJの各遺伝子をT7系発現ベクターに組み込み発現させた。さらに、それぞれの糖転移酵素遺伝子のDNA配列を変えてコードするアミノ酸を部位特異的変異によって改変し、活性部位の同定を試みている。また、染色体上のこれらの遺伝子をそれぞれジーンターゲッテイングして、欠損した菌株を作製した。これらの菌株を用いて遺伝子の発現を調べている。

研究成果

• [文献書誌] Kato,N.,Naito,S.,Arakawa.Y.,et al.: "Crystallization of synthetic Escherichia coli-type lipid A" Microbiol.Immunol.40. 33-38 (1966)
• [文献書誌] Arakawa,Y.,Wacharota rotayankun R.,et al.: "Genetic organization of the Klebsiella pneumoniae cps region responsible for serotype K2 capsular polysaccharide synthesis" J.Bacteriol.177. 1788-1796 (1995)
• [文献書誌] Kato,N.,Arakawa,Y.,Sugiyama,T.,et al.: "Crystallization and analysis of crystals of various chemotypes of R-form lipopolysaccharides from Salmonella spp." Microbiol.Immunol.38. 629-637 (1994)
• [文献書誌] Sugiyama T.,Kido,N.,Komatsu,T.,et al.: "Genetic analysis of Escherichia coli 09 rfb:identification and DNA sequence of phosphomannomutase and GDP mannose pyrophospho-" Microbiology. 140. 59-71 (1994)
• [文献書誌] Wacharotayankun,R.,Arakawa,Y.,et al.: "Enhancement of extracapsular polysaccharidesynthesis in Klebsiella pneumoniae by RmpA2,which shows homology to NtrC" Infect.Immun.61. 3164-3174 (1993)
• [文献書誌] Saeki,A.,Kido,N.,Sugiyama,T.,et al.: "Isolation of rfb clusters directing the synthesis of O polysaccharides consisting of mannose homopolymers and serologic" Microbiol.Immunol.37. 601-606 (1993)
• [文献書誌] 太田美智男: "エンドトキシンの合成-生合性と遺伝支配(「エンドトキシン」中野、小玉編)" 講談社, 327 (1994)