T細胞抗原リセプター遺伝子エンハンサー/サイレンサー領域の解析

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05670293
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 菅野 雅元 千葉大学, 医学部, 助教授 (40161393)
• 研究分担者: 谷口 克 千葉大学, 医学部, 教授 (80110310)
• キーワード: TCR / エンハンサー / etsファミリー

研究概要

TCRαエンハンサー領域を検討したところ、
(1)4個の亜領域のうちTα2亜領域が最も重要であることが判明した。さらにα2亜領域内でもTα2a領域ではなく、Tα2a領域の中のEts-1結合配列と呼ばれている部分が最も重要であることが分かった。
(2)この領域のDNAを用いてゲルシフト法による解析を行ったところ、3本のバンドが検出された。これら3本のバンドのうち1本のみがEts-1結合配列と呼ばれる領域に対応するバンドであった。この3本のバンドは抗-panEts抗体でスーパーシフトすることより、Ets-ドメインを持つファミリータンパク質であることが判明した。しかし抗-Ets1、抗-Ets2特異的モノクロナル抗体には3本とも反応しないことより、in vivoでのエンハンサー活性に重要な役割を果たしているTα2のEts配列に結合している蛋白質は従来いわれていたようにEts-1ではなく類似の新しい蛋白質であることが明かとなった。ほとんど全ての総説などに「TCRαエンハンサーのTα2領域にはEts-1がん遺伝子産物が結合し、それがエンハンサー活性に重要である。」と説明されているが、我々の研究により、実際はEts-1ではなくEtsドメインを持つ新しい蛋白質であることが判明した。
(3)新しく同定された蛋白質の分子量をUV-クロスリンク法を用いて検討したところ、約10KDaのT細胞特異的に発現している蛋白質であった。さらにクロスリンクの条件を強くしたところ31KDaの蛋白質が弱く結合していることが判明した。
(4)この新しいetsファミリー蛋白質のcDNAクローニングを試みている。etsドメインのアミノ酸に対応するオリゴヌクレオチドを用いて3'-RACE-PCRを行い、新しいetsファミリー遺伝子のcDNAの一部のクローニングに既に成功している。
このcDNAの全長を単離して解析を行っていきたい。

研究成果

• [文献書誌] Akasaka,T.: "A novel ets-releted 10KDa protein is responsible for the TCRα chain enhancer activity but not ets-1 and ets-2" Int.Immunol.(in press).
• [文献書誌] Knno.M.: "mel-18,a Polycomb-related mammalian gene,encoded transcriptional negative regulator with tumor susppressive activity." ENBO J.(in press).
• [文献書誌] Asano,H.: "The mel-18 RING-Filnger gene,genomic organization,promote analysis and Chromosome assignment." DNA Sequence.3. 369-377 (1993)
• [文献書誌] Ishida,A。: "Cloning and chromosome mapping of the human Mel-18 gene whith encodes a DNA-binding protein with a new "RING-finger"motif." Gene.129. 249-255 (1993)