末梢血単核球のサイトカインmRNA発現の定量的解析法の開発とその臨床応用

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05671012
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 有永 信哉 九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (70151181)
• 研究分担者: 中島 秀彰 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (20253528) ; 井上 裕 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (90203249)
• キーワード: メッセンジャーRNA / 定量 / TNF / 癌免疫化学療法 / インターロイキン2 / インターロイキン6

研究概要

最終年度は以下の基礎的検討ならびに臨床的応用を行った。
1.末梢血単核球のサイトカインmRNA発現の定量的定法の開発
末梢血単核球からmRNAのみを抽出し、予めコピー数のわかっているcRNA(内部コントロール)とともにRT-PCR法を施行することにより、mRNA発現を定量的に測定するassay系を樹立した。更に、in vitro、in vivoの両方の系について本法の信頼性と再現性を検討したところ定量的RT-PCR法の妥当性を得た。
2.LAK細胞におけるサイトカインmRNA発現の定量的解析
末梢血単核球にIL2を添加培養することによって得られるLAK細胞の殺細胞効果とTNF、IL1α、IL1β、mRNAの発現量の変動を経時的に解析したところLAK活性の上昇に伴ってTNF、IL1α、IL1βの発現量が増加することが示された。
3.臨床癌患者における癌免疫化学療法前後の末梢血単核球のサイトカインmRNA発現量の変動
1)癌化学療法剤IL2併用療法を施行した癌患者(10例)についてその療法前後での末梢血単核球のTNFmRNA発現量を測定したところ、療法後には全例で4.2〜35.0倍の発現量の増加が認められたが、TNFmRNAの発現量が症例毎に発現パターンは異なり、末期癌患者では療法前からTNFmRNAの基礎値が高い傾向を認めた。
2)癌化学療法剤IL2併用療法を施行した癌患者(10例)についてその療法前後での末梢血単核球のIL1α、IL1β、mRNA発現量を測定したところ、療法後では全例でその値は増加した。
4.手術侵襲時のサイトカインmRNAの変動う
手術侵襲時のIL6mRNA発現がウリナスタチン(UTI)投与により抑制することが示された。

研究成果

• [文献書誌] 足立昌士,有永信哉他: "末梢血単核球のTNFmRNAの定量的測定と臨床応用" 日本外科学会雑誌. 94. 1124-1124 (1993)
• [文献書誌] Arinaga,S.etal.: "Laboratory correlates of chemoimmuotherapy with cau-dose recombi nant in Toreuki and mitomycin C in patieuts with advanced carcinoma." Cancer Invest.12. 588-596 (1994)
• [文献書誌] Arinaga,S.etal.: "Lymphokine-activated killer cell function of lymphocytes from vegional lymph nodes in patients with gastric carcinoma." J.Sung.Oncol.(in press). (1995)
• [文献書誌] Arinaga,S.etal.: "Cytotoxic cell furction and pnenotypic analysis of peipheral Hood mono cells in cancer patieuts tveated with low-dose IL2and" I Cancer Immunol.Immunathevapy. 37. 220-226 (1993)
• [文献書誌] Karimine,N,Arinaga.S.etal: "Lymphokine-activated killer cell function of periphenal bood mowoneuclear cells,spleeucells and vegional lymph node cells in gastric cancer pationts." Clin,Exp.Immunol.96. 484-490 (1994)
• [文献書誌] Ueo,H,Arinaga.S.etal.: "The production of IL at operative wound sites in swgical pationts." Surg.Gynecol.Obstet.179. 326-332 (1994)