| 研究概要 |
本年度は,PCR-SSCP法を用い、末梢血中癌細胞のP53およびK-ras癌遺伝子の変異を検出するための基礎的実験条件を確立することを目的とした。その結果,
1.人由来胃癌および大腸癌細胞株10株中数株に,P53または,K-ras遺伝子の変異を確認した。
2.これらの遺伝子異常を伴う細胞株を用いて,PCRの各実験条件を決定した。
〓プライマーの配列
P53:exon5 5′TTCCT CTTCC TGCAG TACTC3′/5′GCAAA TTTCC TTCCA CTCGG3′,DELTA
exon6 5′ACCAT GAGCG CTGCT CAGAT3′/5′AGTTA CAAAC CAGAC CTCAG3′,DELTA
exon7 5′GTGTT GTCTC CTAGG TTGGC3′/5′CAAGT GGCTC CTGAC CTGGA3′,DELTA
exon8 5′CCTAT CCTGA GTAGT GGTAA3′/5′CCAAG ACTTA GTACC TGAAG3′,DELTA
K-ras:condon12 5′GGCCT GCTGA AAATG ACTGA3′/5′GTCCT GCACC ACTAA TATGC3′,DELTA
〓PCRの温度とサイクル数
94℃ 30秒→55℃ 30秒→72℃ 60秒 これを30サイクル行なう。
以上の条件でデーターの再現性が確認された。
現在,最低何個位の癌細胞があれば測定可能か検討を進めている。
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