ヒト大腸癌におけるMAGE癌退縮抗原遺伝子発現とその生物学的意義

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05671102
• 研究機関: 久留米大学
• 研究代表者: 藤原 良一 久留米大学, 医学部, 講師 (20209133)
• 研究分担者: 緒方 裕 久留米大学, 医学部, 助手 (20177124) ; 伊東 恭悟 久留米大学, 医学部, 教授 (50125499)
• キーワード: MAGE遺伝子 / 癌退縮抗原 / 大腸癌 / 固形癌 / 遺伝子発現 / MAGE遺伝子ファミリー / 血中抗体 / キラーT細胞

研究概要

1)大腸癌を含むひと固形癌でのMAGE遺伝子の発現を50症例以上において検討し、その50%以上にmRNAレベルでの発現が認められた。その一方で正常組織では全く認められなかったことよりMAGE遺伝子発現はきわめて癌特異的であることが示唆された。さらにMAGE I,III,IV,IV-1,VIなどのMAGEファミリーはそのcDNA遺伝子をクローニングした。また、MAGE I,IV-1のRecombinant proteinを作製し、それに対する血中抗体(癌患者)の存在を確認するとともに、MAGE-I recombinant protein発現性大腸菌を抗原として患者末梢血リンパ球より自家癌を選択的に障害するキラーT細胞を誘導した。これらより、当初の計画に準じた成果があげられたものと考えられる。
2)大腸癌を含む消化器癌におけるMAGE遺伝子の発現は口腔癌11/15例(73%)、胃癌細胞癌2/2例(100%)、肝癌細胞株6/6例(100%)大腸癌7/10(70%)であった。これらより消化器癌ではきわめて高等に発現されていることを見出した。現在、良性ポリープや粘膜過形成組織における発現を検討中である。
3)MAGE遺伝子の機能を明らかにし、かつMAGEファミリーの型別を決定するために、MAGEファミリーのcDNAクローニング(ORF全長を含む1038bp)を実施した。その結果、MAGE III,IV,IV-1,VI cDNA構造はMAGE Iとは75%以上の相同性を有するものの、ミリステァリン酸やTope IIの結合部位を有する新しい(これまでに報告されていない)ものであることが判明した。また、制限酵素切断部位も判明したので現在消化器癌に発現するMAGEファミリーの型別を決定中である。
4)Western法にて癌患者血清中にMAGE I recombinant proteinに対する抗体が存在することを見出した。現在、そのエピトープマッピング及び特異性を検討中である。
5)MAGE 1 recombinant proteinを発現するDH5alpha(E.Coli)にて肝癌患者PBMCを頻回刺激し、MAGE I反応性T細胞株を樹立した。同T細胞はCD3^+CD4^+TCRalphabeta^+であるが自家癌に対して細胞障害性を有しており、かつ肝癌10例中6例にcytotoxicityを示すものの、肺癌、卵巣癌K562細胞に対しては障害性を示さなかった。現在、同CTL株のMHC拘束性と抗原特異性を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Hoshino,T.,Itoh,K.,et al.: "Tissue-specific distribution and age-dependent increase of human CDll^+T cells" The Journal of Immunology. 151. 2237-2246 (1993)
• [文献書誌] Nakao,M.,Itoh,K.,et al.: "A monoclonal antibody(H227) recognizing a new epitope of 4F2 molecular complex associated with T cell activation." Cellular Immunology. 152. 226-233 (1993)
• [文献書誌] Hirohashi,N.,Itoh,K.,et al.: "A novel antigen(H47 Ag)on human lymphocytes involved in T cell activation." Cellular Immunology. 152. 371-382 (1993)
• [文献書誌] Umezu,Y.,Itoh,K.,et al.: "Increase in the ability of human cancer cells to induce cytotoxic T lymphocytes by ultraviolet irradiation." Cancer Immunol Immunother. 37. 392-399 (1993)
• [文献書誌] Fujimaki,W.,Itoh,K.,et al.: "Cytokine production and immune cell activation in melanoma patients treated with liposomal muramyl tripeptide (CGP 19835A Lipid)." Cancer Biotherapy. 8. 307-318 (1993)
• [文献書誌] Murray,JL.,Itoh,K.,et al.: "Phase I trial of murine monoclonal antibody 14G2a administered by prolonged intravenous infusion in patients with neuroectodermal tumors." Journal of Clinical Oncology. 12. 184-193 (1994)
• [文献書誌] Kyogo Itoh,et al.: "Gann Monograph on Cancer Research 40." Edited by Takeshi Ogura,Fumimaro Takaku., 117-123 (1993)
• [文献書誌] Kyogo Itoh,et al.: "Renal cell carcinoma." edited by Eric A.Klein,Ronald M.,Bukowski,James H.Finke., 95-105 (1993)