| 研究概要 |
本研究は標的分子に含まれる共役ジエン基を特異的かつ効率良くラベル化するための蛍光性あるいは発光性求ジエン試薬の設計と合成及び求ジエン試薬を用いて生体試料の高選択的,高感度定量分析への応用を目的とする。本年度は既に合成に成功している蛍光性求ジエン試薬(DMEQ-TAD)を用いたビタミンD代謝物,レチノイン酸及びマイクロシスチン類の蛍光定量分析への応用に関する研究を行った。
1)ビタミンD代謝物の蛍光アッセイ法:前年度までに血中の25-OHD_3,24,25-(OH)_2D_3及び25,26-(OH)_2D_3の蛍光定量法を確立し実用化している。今年度は臨床診断上最も重要な活性型1,25-(OH)_2D_3(濃度は35-70pg/mL血漿)の蛍光定量に取り組みその蛍光アッセイ法を確立することができた。従って、DMEQ-TADを用いる蛍光定量法により血中の主要ビタミンD代謝物の一斉分析が可能となった。
2)レチノイン酸とDMEQ-TADとの反応及び定量分析への応用:共役ペンタエン構造を持つtrans-レチノイン酸及びその幾何異性体とDMEQ-TADとの環化付加反応ではいずれも高い位置選択性を示し,その反応機構を提出した。またtrans-レチノイン酸は唯一モノ付加体,9-cis-レチノイン酸はビス付加体しか生成しないことが判明した。このDMEQ-TADの反応性はレチノイン酸の蛍光ラベル化に極めて優利であり,現在生体試料中のレチノイン酸の蛍光アッセイ法の開発を行っている。
3)アオコが産生する毒素マイクロシスチン類の蛍光ラベル化反応:マイクロシスチンは環状のヘプタペプチドで環外の側鎖部分に共役ジエン基を含む。DMEQ-TADは極めて極性の高いペプチド分子とも効率良く反応し,蛍光ラベル化体を生成する。現在環境中のマイクロシスチン類の蛍光ラベル化と分析法について検討している。
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