サル脳P450の構造、機能解明

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05671807
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 大森 栄 千葉大学, 医学部附属病院, 助教授 (70169069)
• 研究分担者: 北田 光一 千葉大学, 医学部附属病院, 教授 (90110345)
• キーワード: サル / 脳 / 肝 / チトクロムP450 / 薬物代謝 / ミクロゾーム

研究概要

先ずカニクイザル脳を用い、肝臓P450に対する抗体を用いP450蛋白の発現を確認し、またいくつかの薬物代謝活性を認めた。次いで、mRNAを抽出し、cDNAライブラリィを作成しイムノスクリーニングを行ったが、P450の全一時構造をコードするフラグメントを得ることは出来なかった。用いたいくつかのP450に対する抗体はラットあるいはヒトP450を抗原としたものであったことから、カニクイザル肝からP450の精製を試み最終的に4種のP450を単離することに成功した。同時にドグエラヒヒよりカニクイザルP450CMLc(P4503Aenzyme)と極めて類似したP450(P450BLa)の単離にも成功した。これらのP450に対する抗体を用いて脳、肝よりP450をコードする遺伝子をスクリーニングした結果、肝よりP450CMLa(P450 2B enzyme)の遺伝子を解明することに成功した。また、ノーザンブロット分析の結果から、アカゲザル脳においてもP450CMLaと類似したP450が存在することが明らかとなった。この結果ならびにイムノブロット分析の結果から、薬物誘導型P450のサル脳における存在が明らかなものとなった。現在もPCRを用い脳P450の構造について肝P450と平行して研究を進めており、これまで明らかとなったサル肝P450ばかりでなく脳P450についてもその構造が解明されると思えわれる。その機能については、肝P450のそれと比較することにより新たに脳におけるP450の役割が明らかになる可能性がある。

研究成果

• [文献書誌] S:Ohmori,C.Shirakawa,K.Motohashi et al.: "Purification frommicrosomes from untreateed cynomolgus monkays of cytochrome P450 closely related to human cytochrome P450 286" Molecular Pharmacology. 43. 183-190 (1993)
• [文献書誌] S.Ohomori,T.Horie,F.P.Auengenich,M,Kiichi et al: "Purification and characterization of two forms of hepatic cytochroml P450 from untreated cynomolus monkeeys" Arcluives of Biochemistry and Bioplysics. 305. 405-413 (1993)
• [文献書誌] S.Ohmori,K.Chiba,H.Nakasa,T.Horie and H.Kiyada: "Characterization of monkey cyfochrome P450,P450CHLd,reoposible for S-mepheny foin 4'-hydroxylation in hepatic microsomes of cynondgus monkeys" Archievis of Biochemistry and Biphysics. 311. 395-401 (1994)
• [文献書誌] S.Ohomori,S.Kudo,H.Nakasu,T.Horie and M.Kitada: "Purificationaual characterization of cytochrome P450 3Avnzyme from hepatit microsomes of doguern baboons" Biological & Pharmaceutical Bulletin. 17. 1584-1588 (1994)