高等動物細胞の染色体複製開始点単離法の開発

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05671860
• 研究機関: 理化学研究所
• 研究代表者: 村上 康文 理化学研究所, 細胞生理学研究室, 先任研究員 (90200279)
• 研究分担者: 浴 俊彦 理化学研究所, 細胞生理学研究室, 研究員 (40192512)
• キーワード: DNA複製 / 複製開始点 / ゲノム解析 / SV40 / DNA修復

研究概要

高等動物細胞の染色体複製機構はこれまでDNA腫瘍ウイルスをモデルとして解析が進められてきており、ウイルスDNAの複製開始機構・新生DNA鎖の伸長機構などについて詳細な知見がすでに得られているものの、宿主である高等動物細胞の染色体複製機構の研究は、十分な知見は得られておらず、とりわけ染色体複製開始点の解析は殆どなされていない。複製開始反応が一定の箇所から開始するかどうかさえ一致した見解が得られていないのが現状である。この様な根本的な疑問に解答を与えるべく、本研究を実施した。本年度は、最初に新生DNA鎖の伸長反応を特異的に阻害し、複製開始点のごとく近傍のみを特異的に標識し、標識されたDNAを濃縮単離する系の確立を行い、複製開始点付近のDNAをクローニングすることに成功した。さらに、ヒトゲノムの塩基配列データの解析をも進めているが、最低限複製開始点か複数個出現することが確実であると思われる長さの領域について塩基配列の決定を実施し、得られた塩基配列データの解析を進めた。複製開始点としての活性を持つことが期待されるクローンについて、その生物学的活性を調べる実験系を開始し、これらのクローンを評価することにより今後、高等動物細胞の染色体複製機構の理解が深まっていくものと思われる。

研究成果

• [文献書誌] Murakami, Y., et.al.: "Analysis of the nucleotide sequence of Schacaromyces cerevisiae chromosome VI." Nature Genet.10. 261-268 (1995)
• [文献書誌] Masanori Naitou, et.al: "Sequencing of 23kb fragment, clone gapB and 4682 of Saccharomyces cerevisiae Chromosome VI." Yeast. 12. 77-84 (1996)
• [文献書誌] Masanori Naitou, et.al: "Sequencing of 18.8kb fragment, clone 4121 of Saccharomyces cerevisiae Chromosome VI." Yeast. 11. 1525-1532 (1995)
• [文献書誌] Toshihiko Eki, et.al.: "Analysis of a 36.2-kb DNA sequence including the right telomere of chromosome VI from Saccharomyces cerevisiae." Yeast. 12. 149-167 (1996)
• [文献書誌] Toshihko Ekiet.al: "Fifteen Open Readig Frames in a 30.8-kb Region of the Right Arme of Chromosome VI from Saccharomyces cerevisiae." Yeast. 12. 177-190 (1996)