| 研究概要 |
本研究ではp従来困難であったクローン化ゲノムDNA中の遺伝子の探索p対応するcDNAの単離を効率化するためのp新技術の開発を行ったz配列非特異的PCRを応用したp高効率液相スクリーニング法はpビオチン標識したプローブとpローンリンカーと呼ぶリンカーを結合したcDNA断片を液相中で会合させ,プローブと特異的に結合する配列を選択してくるものである.この方法により,通常の方法では単離できなかった希少な遺伝子cDNAの分離に成功しており,従来の方法に比べ飛躍的な高効率化が達成された,現在まで,マウスH-2K領域近傍のゲノムDNAをクローニングし、その中に含まれる転写単位を多数分離した.また,この方法でコスミドクローンをプローブとした場合も働くことが明らかとなり,応用範囲が拡がった.これら新しく発見された遺伝子,とくに初期発生過程への関与が示唆される物について,発現,構造解析を行なっている.高効率液相スクリーニング法に関しては,当初の計画どおり進行,応用範囲の広い,既存技術に比し,利点の多い技術が開発されたと思われる.
これまでクローン化したゲノム領域を含む,インサート長約600kbのYACクローンを単離したので,この構造解析を行なう他に,マイクロインジェクション法,或はES細胞との融合法により,YACクローンを導入したトランスジェニックマウス作製も心みている.
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