研究概要 |
ヒトのAMPデアミネースには基本となる種類のアイソザイムが存在し、遺伝子AMPD-1は筋型を、AMPD-2は肝型を、そして第3の遺伝子AMPD-3は赤血球型をコードしている。赤血球型酵素の完全欠損例は、我々が世界で最初に健常人中で発見しているが、この研究ではヒト赤血球型AMPデアミネース欠損の遺伝子変異を固定し、変異遺伝子のスクリーニングを行い、遺伝子変異の種類や変異遺伝子の頻度、分布などを明らかにすることを最終目標とし、またこれらの検討を簡便かつ迅速に行うため、AMPD-3の染色体遺伝子の構造の解明を並行してすすめ、今年度、以下の成果を得た。 1)前年度同定した主たる変異R573Cの遺伝子スクリーニングを行い、変異全体の約75%がこの変異によることが明らかになったが、残りの25%は他の遺伝子変異によると考えられ、cDNAあるいはゲノムDNAの分析で、12例から9種の変異(600de1T,N31OK,A320V,M324T,R331C,R402C,Q433X,W445R,P585L)の同定に成功した。この結果、日本人における赤血球型AMP deaminase欠損の遺伝子変異は同一の変異遺伝子R573Cが約75%を占め,残りの25%は異なった遺伝子変異をもつと考えられる。 2)酵素活性を発現する大腸菌ベクターに遺伝子変異600de1T,M324T,R331Cを導入し、これらの変異も主たる変位R573C同様、酵素欠損の原因であることを確認した。 3)PCR法を駆使し、ゲノムの全エクソン・イントロン接合部の塩基配列を明かにし、ゲノムからののエクソン部を増幅できるようプライマーをデザインし、今後の変異の同定を容易にした。また、LA-PCR法によりゲノム遺伝子を6つのパートに分けて増幅可能とし、AMPD-3遺伝子のおおよその全長を明らかにし得た。
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