自己抗体産生免疫グロブリン遺伝子の単離・解析・再構成

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05671922
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 赤水 尚史 京都大学, 医学部, 助手 (20231813)
• 研究分担者: 松田 文彦 京都大学, 医学部, 助手 (50212220) ; 須川 秀夫 京都大学, 医学部, 講師 (70162857)
• キーワード: VH遺伝子 / TSHレセプター / 抗TSHレセプター抗体 / バセドウ病

研究概要

バセドウ病や甲状腺機能低下症の一部では抗TSH受容体抗体(TRAb)が発症や病態形成に直接的に関与しており、これらの抗体における免疫グロブリン遺伝子の解析は同病の病態・病因研究にとつて極めて重要である。そこで、我々は、平成5年度にバセドウ病TSH受容体抗体産生B細胞クローンの作成し、免疫グロブリンVH遺伝子の単離と解析を行なつたが、平成6年度においては、同クローンのVκ遺伝子も解析した.さらに、原発性甲状腺機能低下症患者からも抗TSH受容体抗体産生クローンを単離し、そのVHおよびVκ遺伝子についても予備的解析を行つた。
1.バセドウ病TSH受容体抗体Vκ遺伝子の検討:B細胞クローンから、VκのcDNAを単離して、その塩基配列を検討した。その結果、他の自己抗体のVκ遺伝子が使用されており、かつ、同様のVκ遺伝子が使用されている場合が2組あつた。すなわち、VH遺伝子と同様に、限られた種類の未分化Vκ遺伝子断片がVκ領域に用いられていた。さらに、単離した抗体はすべてIgM型ながら、すべてのVκ領域にsomatic mutationが認められ,その頻度や部位が抗体活性に重要と考えられた.
2.原発性甲状腺機能低下症患者からのTSH受容体抗体産生B細胞クローンの作成と免疫グロブリン遺伝子の解析:3例の患者の末梢血リンパ球をEB virusでtransformし、バセドウ病の場合と同様にTSH受容体抗体産生B細胞クローンを得た。すなわち、20のTBII(結合阻害型抗体)クローンを得たが、すべてのクローンがTSBAb(生物学的抑制抗体)であつた。他に、TBII陰性・TSBAb陽性2クローンを得た。予備的ではあるが、これらのうち、6クローンのVH・Vκ遺伝子を単離・解析した。その結果、バセドウ病クローンと同様に限られた種類の未分化VH・Vκ遺伝子断片の使用や、VH・Vκ領域でのsomatic mutationが認められた。
以上の研究から、TSH受容体抗体遺伝子の一次構造が明かとなり、VH・Vκ遺伝子断片の限定使用や、VH・Vκ領域でのsomatic mutationの抗体活性における重要性が示された。

研究成果

• [文献書誌] Shin EX. Matsuda F. Fujikura J. Akamizu T. Sugawa H. Mori T. Honjo T: "Cloning of a human immunoglobulin gene fragment containing both VH-D and D-JH rearrangements: implication for VH-D as an intermediate to VH-D-JH formation." Europ J Immunol.23. 2365-2367 (1993)
• [文献書誌] Shin EX. Akamizu T. Sugawa H. Matsuda F. Fujikura J. Mori T. Honjo: "Variable-regions of immunoglobulin heavy-chain genes encoding antithyrotropin (TSH) receptor antibodies of patients with graves' diseasc." J Immunol.152. 1485-1492 (1994)
• [文献書誌] Okuda J. Akamizu T. Sugawa H. Matsuda F. Li H. Mori T: "Preparation and characterization of monoclonal antithyrotropin receptor antibodies (TSH-R Ab) obtained from periferal lymphocytes of hypothyroid patients with primary myxedema." J Clin Endocrinol Metab. 79. 1600-1604 (1994)
• [文献書誌] Nakamura N. Azuma C. Akamuzu T. Sugawa H. Matsuda F. Mitsuda N. Honjo T. Mori T. Yamaji K.: "Heterogeneity and diversity of 1gM and 1gG lupus anticoagulants in an individual with systemic lupus erythematosus." Biochem Biophys Res Commun. 203. 1789-1794 (1994)
• [文献書誌] Li H. Akamizu T. Okuda J. Sugawa H. Matsuda F. Tsubata T. Mori T.: "Isolation of Epstein-Barr virus-transformed lymphocytes producing 1gG class monoclonal antibodies using a Magnetic cell Separator (MACS): Preparation of thyroid-stimulating 1gG antibodies from patients with Graves'disease." Biochem Biophys Res Commun. 207. 985- (1995)
• [文献書誌] 松田文彦: "甲状腺疾患の分子免疫内分泌学「TSHレセプター抗体のVH遺伝子の構造」" 日本臨床, 5 (1994)
• [文献書誌] 赤水尚史、森 徹: "抗TSHレセプター抗体の免疫グロブリン遺伝子について。" ホルモンと臨床, 6 (1994)