ナトリウム利尿ペプチドのジーンターゲティングによる機能解析

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 05680569
• 研究機関: 国立循環器病センター
• 研究代表者: 南野 直人 国立循環器病センター研究所, 薬理部, 室長 (50124839)
• 研究分担者: 宮本 薫 国立循環器病センター研究所, バイオサイエンス部, 室長 (30125877) ; 松尾 壽之 国立循環器病センター研究所, 所長 (50028685)
• キーワード: ナトリウム利尿ペプチド / ナトリウム利尿ペプチド受容体 / ジーンターゲティング / 遺伝子構造解析 / 血圧調節 / 合化、成長

研究概要

ナトリウム利尿ペプチドファミリーはANP、BNP、CNPの三種のペプチドより構成され、対応する2種のグアニル酸シクラーゼ共役型受容体(GC-A,GC-B)に作用することにより、レニン-アンジオテンシン系と拮抗し積極的に体液量や血圧を低下させるシステムを形成している。我々は従来よりこれらのペプチドの機能解析に努めてきたが、本研究では最近開発されたジーンタゲティング法を用いることにより、これらの遺伝子欠損動物を作成し、その機能解析を行うことを企画した。
本年度は、昨年度のマウスANP、BNP、CNP遺伝子に加え、これらの受容体であるGC-A、GC-B遺伝子を3〜4個ずつクローニングし、これらを組み合わせることによりエクソン全体が含まれることを確認した。さらに受容体のグアニル酸シクラーゼ部、プロテインキナーゼ様部、細胞外部等のレイアウトについても明らかにし、現在機能を欠失させるのに適当な部分を選び、その構造を決定中である。ANP遺伝子については6kbのジーンタゲティング用フラグメントの構造とその中のエクソン部について構造確認を行った。CNPについてはヒト、ブタ、ラットでは構造決定されていないエクソン3部分を含む3.2kbのフラグメントについても配列を決定し、エクソン1、2を含む3.2kbフラグメントとの位置的関連を明らかにし、全体として6.5kbの構造を決定した。以上の結果、マウスナトリウム利尿ペプチド及びその受容体については、ジーンタゲティング用の5〜6kbフラグメントの単離とその構造決定、確認を終わりつつあり、neoマイシン耐性遺伝子をエクソン部に含み、hsv-tkを末端に有するジーンタゲティング用変異遺伝子をこれら5種の遺伝子について作製できる状態となった。

研究成果

• [文献書誌] M.Kojima,et al.: "Cloning and characterization of a novel natriuretic peptide in frog (Rana catesheiana.)" J.Biol.Chem.269. 13136-13140 (1994)
• [文献書誌] Y.Ishizaka,et al.: "Adrenomedullin stimulates cyclic AMP formation in rat vascular smooth muscle cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.200. 642-646 (1994)
• [文献書誌] S.Sugo,et al.: "Endothelial cells actively synthesize and secrete adrenomedullin." Biochem.Biophys.Res.Commun.201. 116-1166 (1994)
• [文献書誌] T.Nishikimi,et al.: "Role of endogenous strial natriuretic peptide on systemic and renal hemodynamics in heart failure rats;Endogenous ANP in heart failu" Am.J.Physiol.267. H182-H186 (1994)
• [文献書誌] K.Kitamura,et al.: "Identification and hypotensive activity of proadrenomedullin N-terminal 20 peptide (PAMP)." FEBS Lett.351. 35-37 (1994)
• [文献書誌] S.Sugo,et al.: "Production and secretion of adrenomedullin from vascular smooth muscle cells:Augmented production by tumor necrosis factor-α." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 719-726 (1994)